天门冬酰胺酶产酶菌的筛选及其分离纯化和稳定性研究

来源 :华西医科大学 四川大学华西医学中心 四川大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xf198699
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从5株大肠杆菌中筛选得到左旋天门冬酰胺酶的较高产菌株(Escherichia coli BP2).采用2.5-5%玉米浆培养基(pH7.0-7.5),于37℃振荡培养18小时,每毫升培养液可获得左旋天门科酰胺酶1.0单位.考察了各种添加剂以及天门冬酰胺,天门冬氨酸,氨离子等均不利于酶的形成;赖氨酸,甲硫氨酸和尼克酸胺有利于酶的形成.在紫外条件下诱变后筛选得到的菌株,产酶活性提高了20%.用硫酸铵分级沉淀,DEAE-纤维素DE32层析,制备性PAGE等方法纯化制备出比活力达245.7IU/mg酶,总回收率为10.4%.用SDS-PAGE测定亚基分子量为39.200KD,最适反应pH为7.0.提纯各段均以有抗癌活力的EC-2组分为主.用饱和溶液法制备了化合物C与该酶的复合物,该复合物的抗热稳定性和抗胰蛋白酶水解稳定性均显著提高;37℃水浴中,未保护的酶在第9天时酶活力仅存24.5%,而化合物C保护的酶仍有90.8%的活力;在含有胰蛋白酶的溶液中未保护的酶4小时后活性为零,而化合物C保护的酶仍保留50%以上的活性.
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