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进入21世纪以来，食品安全问题备受重视，过敏疾病的发病率和死亡率亦逐年上升，被世界卫生组织(WHO)认定为当今世界性的重大卫生问题之一。海产品是重要的引起过敏的食品，虾等甲壳类动物及其制品是8类引起过敏的食物中的一类。研究表明，虾过敏原是一种分子质量约36KD的酸性糖蛋白，可引起荨麻疹、风疹、喉痉挛、哮喘和危及生命的过敏反应。因此，研制开发实用、灵敏、特异的虾过敏原成分检测方法及试剂十分必要。
本研究以虾过敏蛋白为研究对象，提取虾过敏蛋白免疫小鼠制备抗虾过敏蛋白多克隆抗体，对抗体进行纯化，并采用过碘酸钠法制备酶标抗体和酶标抗原，以此为基础，建立三种检测虾过敏蛋白的酶联免疫检测方法。具体研究内容如下：
建立间接竞争ELISA法检测虾过敏蛋白。以虾过敏蛋白多克隆抗体包被酶标板，优化包被浓度、竞争反应温度以及时间等因素。结果发现37℃下的检测曲线较为稳定；建立的间接竞争ELISA法的工作条件确定为：虾过敏蛋白的包被浓度为29.2μg/mL，抗虾过敏蛋白抗体的工作浓度为20μg/mL，竞争反应时间为60min，反应温度为37℃。该法测得的IC50值约为20.39ng/mL，检测下限为0.98ng/mL，定量检测范围为2.22～187.13ng/mL。
建立基于酶标多抗的直接竞争ELISA方法检测虾过敏蛋白。以虾过敏蛋白包被酶标板，酶标多抗为检测抗体，优化反应条件。结果表明室温下检测所得的IC50值较为一致，拟合曲线较为稳定，而37℃下检测所得的IC50值随着竞争反应时间的延长而增大。建立的基于酶标多抗的直接竞争ELISA的工作条件为：虾过敏蛋白的包被浓度为29.2μg/mL，酶标抗体的工作浓度为6.87μg/mL，酶标抗体的最佳稀释液是含1％BSA的PBST，竞争反应时间为20min，反应温度为室温(20～25℃)，反应一步完成。该方法测得的IC50值约为3.94ng/mL，检测下限为0.83ng/mL，定量检测范围为1.32～159.26ng/mL，组内平均变异系数为7.21%，组间平均变异系数为5.93%。虾过敏蛋白样品检测回收率为78%～91%。
建立基于酶标抗原的直接竞争ELISA方法检测虾过敏蛋白。以抗虾过敏蛋白多克隆抗体包被酶标板，酶标抗原与样品进行竞争，优化反应条件。结果表明反应温度对剂量-效应曲线有显著影响，37℃下dcELISA的IC50波动幅度较大；而20～25℃下的IC50值波动幅度较小，检测所得的IC50值较为一致，拟合曲线更为稳定。确定该直接竞争ELISA的工作条件为：抗虾过敏蛋白抗体的包被浓度为6.84μg/mL，酶标抗原的工作浓度为6.02μg/mL，酶标抗原的最佳稀释液为含1%BSA的PBST，竞争反应时间为30min，反应温度为室温(20～25℃)，反应一步完成。建立的标准曲线IC50值约为3.94ng/mL，检测下限为0.13ng/mL，定量检测范围为0.12～128.86ng/mL，组内平均变异系数为6.16%，组间平均变异系数为2.73%。虾过敏蛋白检测回收率为82%～98%。
在建立虾过敏蛋白直接竞争ELISA法的同时，对于抗原和抗体包被的酶标板的稳定性以及酶标抗体和酶标抗原的稳定性进行了定期测定。结果表明：包被抗原的酶标板可在2～8℃下放置约2个月。抗体包被的酶标板在2～8℃下可放置1.5个月。酶标抗体以1%BSA作为保护剂、4℃条件下至少可放置3个月；在-20℃条件下，加1%BSA或等量甘油可放置3个月。酶标抗原在以1%BSA作为保护剂，在4℃或-20℃条件下可放置3个月。