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目的:
探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin rHuEPO)对盲肠结扎穿孔术(CLP)所致脓毒症大鼠急性肾损伤的保护作用。
材料与方法:
260只7周龄健康雄性SD大鼠随机分为:对照组(n=10),假CLP组(假手术组,n=50),CLP组(脓毒症组,n=50),rHuEPO大剂量组(n=50)、rHuEPO中剂量组(n=50)、rHuEPO小剂量组(n=50)。采用盲肠结扎穿孔术复制脓毒症模型,rHuEPO大、中、小剂量组造模后即刻分别经尾静脉推注rHuEPO5000U/kg、1000U/kg、300U/kg。假CLP组,CLP组,rHuEPO大、中、小剂量组按注药后2h、6h、12h、24h、36h时点分成5个亚组,各个亚组均10只大鼠,分别在各时点随机处死大鼠,采用酶联免疫法(ELISA法)分析测定血清中肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白细胞介素-6(IL-6)、肾损伤分子-1(KIM-1)、诱导型一氧化氮和酶(iNOS)的水平;免疫组化法检测大鼠肾组织NF-κB蛋白表达;采用光镜和透射电镜观察肾组织形态学变化。
结果:
脓毒症组及rHuEPO治疗组大鼠CLP术后6小时均发生了急性肾损伤改变。
1、肾功能
CLP术后6h,大鼠血清中Scr、BUN开始升高,24h达最高。与假CLP组相比,CLP组及rHuEPO大、中、小剂量组大鼠血清中Scr、BUN显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与CLP组相比,rHuEPO大、中剂量组大鼠血清中Scr、BUN降低,HuEPO大剂量组与中剂量组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。rHuEPO小剂量组与CLP组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。
2、各时点大鼠血清中TNF-α、IL-6、KIM-1、iNOS水平的变化
大鼠血清中TNF-α、IL-6、KIM-1、iNOS水平,假CLP组显著低于CLP组及rHuEPO大、中、小剂量组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。与CLP组相比,rHuEPO大、中剂量组大鼠血清中TNF-α、IL-6、KIM-1、iNOS的水平均下降,rHuEPO大剂量组与中剂量组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。rHuEPO小剂量组与CLP组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。
3、术后24h时肾组织NF-κB的免疫组化检测结果
肾组织NF-κB蛋白表达水平,假CLP组水平显著低于CLP组及rHuEPO大、中、小剂量组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。与CLP组相比,rHuEPO大剂量组肾组织NF-κB蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。rHuEPO中、小剂量组与CLP组相比肾组织NF-κB蛋白表达水平无显著差异,差异无统计学意义(P>0.05)。
4、光镜及电镜观察肾组织病理学改变
CLP组表现为肾小球皱缩明显,肾小管上皮细胞变性,肾小管囊腔扩张,管型形成,肾间质大量炎性细胞浸润;肾小球基底膜部分增厚呈驼峰状,部分足突细胞融合,部分血管内皮细胞增生变厚。rHuEPO大剂量组肾小球及近曲小管病理学改变均较CLP组轻。
结论:
1、rHuEPO能够降低脓毒症所致急性肾损伤大鼠血清中TNF-α、IL-6、iNOS、KIM-1的水平,发挥调节炎症反应、改善肾功能的作用,对脓毒症所致急性肾损伤具有一定的保护作用,且呈剂量依赖性。
2、肾损伤分子-1(KIM-1)为较敏感、可靠的判断脓毒症所致急性肾损伤的生物学指标,可起到早期预警的作用。