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蜱是一种可以传播多种病原体的节肢动物,虫媒病毒(arboviruses)包括蜱传病毒(Tick-borne viruses,TBVs),它们在自然界中通过媒介蜱和宿主动物之间循环而持续存在。分子生物学技术的发展日新月异,不断发现新蜱传病毒。负链RNA病毒宿主范围广泛,包括植物、节肢动物、哺乳动物等,因此既会对人类造成疾病又能对畜牧业和农业造成损失。近年来,科学家们发现了很多新的负链RNA病毒,但由于未能获得其分离株进而缺乏进一步的研究。本研究选取2018年我国黑龙江省五个采集点采集的游离全沟硬蜱77只,提取核酸后基于第二代测序技术,探索荆楚病毒目(Jingchuvirales)与单股负链RNA病毒目(Mononegavirales)的新蜱传病毒并分析进化地位。检测出了Ixodes persulcatus mononegavirales-like virus HLJ、Ixodes persulcatus chuvirus HLJ、Ixodes persulcatus dimarhabdovirus HLJ三种新病毒。发现Ixodes persulcatus mononegavirales-like virus HLJ属于未分类的Mononegavirales,与中国黑龙江省报道的Deer tick mononegavirales virus病毒进化关系最近。Ixodes persulcatus dimarhabdovirus HLJ属于Mononegavirales的弹状病毒科。Ixodes persulcatus chuvirus HLJ属于Jingchuvirales,与Hubei chuvirus-like virus 3、Wuhan Mosquito8亲缘关系最近。我们尝试分离这三种新的病毒,结果分离到了与Ixodes persulcatus chuvirus HLJ接近的病毒,暂命名为MIV-2。选取微小扇头蜱胚胎源细胞系(BME/CTVM23)、非洲绿猴肾细胞(VERO)、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、肩突硬蜱胚胎源细胞系(IDE8)对MIV-2进行体外细胞分离培养,发现其敏感细胞系可能是BME/CTVM23,在此基础上对MIV-2进行全基因组测序、建立检测方法、进化分析及初步结构研究。我们在不同蜱种中共分离到四株MIV-2,分别是全沟硬蜱(Ixodes persulcatus)、森林革蜱(Dermacentor silvarum)、长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)和微小扇头蜱(Rhipicephalus microplus),全基因组11.36kb,在获得全基因组序列的基础上设计了特异性荧光定量PCR引物,建立了检测方法,并进行进化分析,发现在法国、巴西、特立尼达和多巴哥、中国、泰国和本次研究中发现的MIV-2,虽然来自不同国家地区,然而MIV-2的基因序列却保持了高度一致性。在不同蜱种中发现的MIV-2同源性也较高。我们对MIV-2的环形结构进行了初步认证,因此我们认为MIV-2具有保守性,可能与其环状结构有关。且对环状楚病毒结构进行分析,认为其有相似的结构特征。对我国云南省、贵州省等七个省市共十五个蜱种携带MIV-2进行感染率调查。调查发现,粒形硬蜱(Ixodes granulatus)、微小扇头蜱(Rhipicephalus microplus)、卵形硬蜱(Ixodes ovatus)、龟形花蜱(Amblyomma testudinarium)、猛突血蜱(Haemaphysalis montgomeryi)、长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)、嗜群血蜱(Haemaphysalis concinna)、森林革蜱(Dermacentor silvarum)八种蜱种均检测到MIV-2。通过分析发现我国多地多蜱种存在MIV-2,其中吉林省和云南省感染率较高。且通过统计学分析,不同蜱种携带MIV-2的载量存在差异性,但由于样本量有限,并不能排除其他检测蜱种中不携带MIV-2。综上所述,本研究通过高通量测序,用序列比较和基因注释的方法来找到新的病毒,在东北地区的全沟硬蜱中共发现了三种新发蜱传病毒,并获得了MIV-2的分离株,通过进化分析及其我国其他地区该病毒流行率及携带蜱种的调查,为了解其进化规律、优势蜱种、感染状况提供了基础数据。