罗氏沼虾胸神经节性腺刺激激素的分离纯化与卵黄磷蛋白研究

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  本论文以罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)为研究对象,运用凝胶过滤层析和HPLC技术对卵巢成熟的罗氏沼虾胸神经节所含蛋白进行了分离纯化和活性研究,同时还与卵巢未成熟的罗氏沼虾脑和胸神经节所含蛋白进行了比较;运用免疫沉淀法对罗氏沼虾不同发育期的卵巢和卵巢不同部位的蛋白浓度进行了研究;通过凝胶过滤和离子交换层析,初步分离纯化了斑节对虾(Penaeusmonodon)的卵黄磷蛋白(Vitellin,Vn),并利用已制备的罗氏沼虾Vn抗体对其进行了免疫学检测。   通过免疫沉淀法对罗氏沼虾不同发育期卵巢和卵巢不同部位的蛋白浓度关系进行了研究,结果表明随着卵巢发育期的发展,卵巢总蛋白和Vn都是不断增加的,而且Vn占总蛋白的百分比与卵巢发育期是正相关的;对于卵巢的不同部位,中部比头尾部含有更多的Vn,而且中部Vn所占总蛋白的比重也比头尾部高。卵巢未成熟的罗氏沼虾胸神经节的凝胶过滤层析和HPLC分离图谱与卵巢成熟的罗氏沼虾胸神经节存在较大的差别,卵巢未成熟的胸神经节的HPLC图谱得到产物比卵巢成熟的少,而且在卵巢成熟的胸神经节HPLC图谱中出现的GSH活性蛋白峰在卵巢未成熟的胸神经节HPLC图谱中并没有出现。而卵巢未成熟的罗氏沼虾脑比胸神经节的HPLC分离图谱要复杂得多,说明脑里分泌的激素类物质比胸神经节多。通过Sepharose6B凝胶过滤和DEAE-SepharoseF.F离子交换层析,初步分离纯化了斑节对虾的Vn,经过SDS-PAGE以及与罗氏沼虾Vn抗体的免疫印迹可以发现,斑节对虾Vn由五个亚基组成,与罗氏沼虾Vn抗体没有免疫交叉反应。
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