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第一部分小分子干扰RNA对胃癌细胞E2F-1表达及其功能研究目的探讨小分子干扰RNA（siRNA）对胃癌MGC803细胞E2F-1基因表达及其生物学行为的影响。方法用LipofectamineTM2000把E2F-1-siRNA（实验组）和negativecontrol-siRNA（阴性对照组）转染MGC803细胞,转染48h后,采用实时定量PCR（Real-time quantitative PCR）及蛋白印迹（western blotting）技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达,四唑盐（MTT）法检测MGC803细胞增殖的变化,流式细胞仪检测MGC803细胞周期变化。应用体外侵袭实验及克隆实验分别检测E2F-1-siRNA对胃癌MGC803细胞侵袭力和增殖力的影响。结果E2F-1-siRNA和阴性对照siRNA由脂质体介导成功转染胃癌MGC803细胞,E2F-1-siRNA有效抑制了胃癌细胞E2F-1 mRNA的表达,与阴性对照组及未转染组细胞比较分别降低了84.8%和85.3%（P＜0.05）;E2F-1-siRNA抑制胃癌MGC803细胞E2F-1蛋白的表达,与阴性对照组及未转染组细胞比较降低了77.2%和79.6%;E2F-1-siRNA抑制MGC803细胞的增殖,与阴性对照组和未转染组比较增殖分别抑制了69%和81.6%,差异有统计学意义（P＜0.05）;E2F-1-siRNA促使更多MGC803细胞DNA含量聚集于G2/M期附近,G2/M期DNA含量比例为（54.98±3.46）%,与阴性对照组（44.70±3.82）%和未转染组（31.47±2.12）%比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。同时,细胞体外侵袭力及增殖能力相应减弱（P＜0.05）。结论E2F-1-siRNA能有效抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1mRNA及蛋白的表达,使G1期细胞的DNA含量下调,同时显示细胞分裂停滞在G2/M期附近,进而抑制其增殖,并在一定程度上抑制了胃癌细胞的侵袭能力,E2F-1有望成为胃癌基因治疗的有效靶点。第二部分转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及沉默效应目的转录因子E2F-1作为细胞周期进程中重要的调控因子,与肿瘤的发生有着密切的关系。本研究通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA（smallinterfering RNA,siRNA）表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响。方法将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因的siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1-CMVneo表达质粒,并做酶切及测序鉴定。用脂质体把构建的重组质粒转染至MGC803细胞,采用实时定量PCR（real-time quantitative PCR）及蛋白印迹（western blotting）技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达。结果经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-1 siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因的mRNA及蛋白的表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86.4%、86.1%和81.5%、79.6%。结论成功构建了E2F-1 siRNA表达质粒,pSilencer4.1-E2F-1能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础。第三部分基因表达谱芯片筛选E2F-1小分子干扰胃癌细胞的相关差异表达基因目的利用基因表达谱芯片技术筛选转染E2F-1-siRNA（实验组）和negative control-siRNA（阴性对照组）的胃癌MGC803细胞间差异表达基因。方法分别抽取转染E2F-1-siRNA和negative control-siRNA的胃癌MGC803细胞的总RNA。采用逆转录的方法,制成cDNA链,并以两种荧光Cy5和Cy3标记后作为探针,与含有21522条人类22K基因表达谱芯片进行杂交。采用LuxScan 10K/A双通道激光扫描仪（CapitalBio公司）扫描芯片上两种荧光信号,应用LuxScan3.0图像分析软件（CapitalBio公司）对芯片图像进行处理和分析。结果在21522条基因中,胃癌MGC803细胞分别转染E2F-1-siRNA和negative control-siRNA后差异性表达基因18条,其中上调基因8条,下调基因10条,上调与下调的基因中各有1条功能信息不明。结论胃癌发生过程涉及多基因相互作用、多种信号通路相互调节和拮抗。体外干扰E2F-1基因表达后胃癌MGC803细胞中差异性表达的18条基因可能参与了胃癌的发生、发展过程。