肝癌是常见的恶性肿瘤之一,现已成为我国第二位恶性肿瘤致死原因[1]。寻找在肝癌的发生发展过程中发挥重要作用的分子,进而干预肝癌的恶性生物学行为,已经成为该领域的研究热点。我们前期的研究利用我校自主研究发现的NDRG2抑癌基因为诱饵,采用酵母双杂交方法,发现了MSP58基因(58-kDa microspherule protein)[2],进一步的研究发现,MSP58在人脑胶质瘤中有较高水平的表达,其表达程度与脑胶质瘤的病理恶性程度呈正相关[3]。另有研究表明:MSP58蛋白可影响肿瘤细胞的增殖能力[4],其表达程度具有明显的细胞周期相关的特点;它在细胞中过表达可以增强肿瘤细胞的克隆形成能力,并使细胞呈现非锚着依赖生长的恶性表型,且该蛋白可以与多种在肿瘤的发生及增殖过程中发挥重要作用的分子产生相互作用[5]。上述研究表明:MSP58基因是一个对肿瘤增殖有着重要作用的癌基因;对该基因表达的干预有望成为人工干预肿瘤发生发展的新靶点。目前,围绕该基因的有关研究工作正逐步展开,但其在人肝癌细胞中表达方面的研究尚未见报道。本研究利用免疫组化、RT-PCR和Western blot技术,分别对HHCC、HepG2肝癌细胞系和不同恶性程度肝癌组织中MSP58的mRNA水平及蛋白表达水平进行了检测,旨在阐明MSP58在人肝癌细胞中的表达规律。实验一MSP58基因在不同肝癌细胞系中的表达研究目的探讨MSP58在HHCC、HepG2肝癌细胞系中的表达规律。方法应用HHCC,HepG2两种肝癌细胞系,采用半定量RT-PCR和Western blot,探索MSP58基因在不同肝癌细胞系中的表达差异;图片结果应用KDSID软件进行灰度扫描分析,统计方法采用方差分析,以P <0.05(显著差异)定为有统计学意义。结果细胞系检测结果显示,在人肝癌细胞系HHCC、HepG2中,MSP58在mRNA及蛋白水平均有表达,其表达量在这两种细胞系中无显著差异(P >0.05)。结论MSP58在HHCC和HepG2肝癌细胞系中均有表达;其表达量在这两种细胞系中无显著差异。实验二MSP58基因在肝细胞癌中的表达与定位研究目的研究在不同分化程度的肝细胞癌组织中MSP58蛋白的表达情况及其在癌细胞中的定位规律。方法本实验随机收集了100例已经病理确诊为肝细胞癌的癌组织标本和30例正常肝组织标本。以正常肝组织标本作为对照组;按WHO的病理分级标准将肝细胞癌组织标本分为3组,各组根据其分化级别分别命名为:高分化组(32例)、中分化组(53例)、低分化组(15例)。所有标本均经10%福尔马林液固定、石蜡包埋切片,然后进行MSP58蛋白免疫组织化学染色和随机图像采集。图片结果采用Image pro-Plus软件进行测量分析,对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和q检验,数据以均数±标准差(x±s)表示,检验水准α=0.05。结果100例肝细胞癌组织中有83例MSP58蛋白免疫组化染色阳性,检出率达83%;对照组30例正常肝组织中有7例MSP58阳性,检出率23.3%;余结果为阴性。各组间MSP58蛋白表达程度以对照组最低,且与其余各组比较均有统计学意义;在不同分化级别组间MSP58蛋白表达程度的比较结果:高分化组阳性率低于中分化组,中分化组低于低分化组,且各组间比较均有显著差异(P <0.05)。MSP58蛋白阳性表达在胞浆内,呈棕黄颗粒。结论MSP58蛋白表达量与肝细胞癌分化程度有关,随肝细胞癌恶性程度的增高而增强;该蛋白主要的表达部位在胞浆内。