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目的：泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰方式,受到细胞外信号的严格调控。我室研究证明，PDGF-BB可以诱导血管平滑肌细胞(VSMC)标志物——SM22α发生磷酸化和泛素化,并且该过程与SM22α蛋白表达水平下调具有时相相关性。因此，我们推测SM22α发生泛素化可能对VSMC的增殖产生影响。本研究通过转染SM22α及其泛素化突变体，观察SM22α泛素化修饰对PDGF-BB诱导的VSMC增殖的影响，探讨SM22α泛素化修饰的意义及其分子机制。方法与结果：1PDGF-BB对VSMC细胞增殖活性的影响MTT和细胞计数分析结果显示，PDGF-BB刺激12h时，VSMC增殖活性显著升高，24h时达到高峰，呈时间依赖性。2PDGF-BB对SM22α泛素化水平的影响免疫共沉淀结果显示，PDGF-BB作用于VSMC12h，SM22α的泛素化水平显著增高，24h达高峰，48h时仍维持在较高水平。该变化与细胞增殖活性增加趋势相吻合，且具有时相相关性。3HA-SM22α与泛素化位点突变体的构建与鉴定分别构建HA-SM22α和HA-SM22α泛素化位点突变的融合蛋白表达质粒，重组质粒经PCR扩增、EcoR I/Xho I双酶切及测序鉴定后，命名为HA-SM22α、HA-SM22α(K17R)、HA-SM22α(K20R)、HA-SM22α(K21R)、HA-SM22α(K89R)和HA-SM22α(K121R)。4SM22α泛素化突变体对PDGF-BB诱导的VSMC增殖的影响利用siRNA敲低内源性SM22α的表达，分别将SM22α野生型(WT)及泛素化突变体转染VSMC，然后用PDGF-BB刺激24h。MTT和细胞计数分析结果表明，野生型HA-SM22α可以抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖，而HA-SM22α(K21R)则增强PDGF-BB的促增殖活性。5SM22αK21泛素化突变体对PDGF-BB诱导的PCNA表达的影响利用siRNA敲低内源性SM22α后，过表达野生型SM22α及K21泛素化突变体SM22α(K21R)，再给予PDGF-BB刺激24h。Western Blot结果显示，PDGF-BB可诱导PCNA的表达，转染野生型HA-SM22α显著抑制PDGF-BB诱导的PCNA表达上调，而转染HA-SM22α(K21R)则不具有这样的抑制作用。6SM22αK21泛素化突变体对PDGF-BB诱导的ERK1/2信号通路的影响利用siRNA敲低内源性SM22α，然后过表达野生型SM22α及K21泛素化突变体SM22α(K21R)，再给予PDGF-BB刺激30min。Western Blot结果提示，HA-SM22α(K21R)突变体丧失对ERK1/2增殖信号通路的抑制作用。结论：1PDGF-BB可以诱导SM22α发生泛素化。2HA-SM22α(K21R)失活突变体丧失对ERK1/2信号通路激活和VSMC增殖的抑制作用。