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目的:既往研究证实胰岛纤维化是2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)常见病理特征之一。业已明确胰腺星状细胞(pancreatic stellate cell,PSC)是胰腺纤维化进程中的主要效应细胞。前期研究发现活化PSC可抑制胰岛β细胞增殖,促进其凋亡。在活化PSC分泌的多种产物中,galectin-1(Gal-1)对细胞的生长、凋亡发挥着重要的调节作用。本研究拟探讨Gal-1在PSC促进胰岛β细胞凋亡及影响胰岛β细胞胰岛素分泌过程中的作用。
方法:
1、运用Western blot检测活化PSC胞内Gal-1的表达及培养上清中Gal-1的分泌;通过免疫荧光染色进一步证实活化PSC表达Gal-1。
2、提取胰腺星状细胞上清(pancreatic stellate cell-supernatants,PSC-SN),采用50% PSC-SN干预Ins-1,并使用20mM Thidigalactoside (TDG)阻断PSC-SN中Gal-1的作用,电化学发光免疫分析法(electrochemiluminescent immunoassay,ECLIA)检测干预24小时上清中胰岛素水平;Annexin Ⅴ-PI标记后行流式细胞术分析,检测干预24小时Ins-1的凋亡水平。
3、采用人重组Gal-1(human recombined galectin-1),分别以0、0.2μg/ml、1.0μg/ml、5.0μg/ml浓度直接干预体外培养的Ins-1,ECLIA分析Gal-1干预Ins-1 24小时后上清中胰岛素水平;运用流式细胞术检测不同浓度人重组Gal-1干预24小时对Ins-1凋亡的影响。
结果:
1、Western blot检测到活化PSC胞内表达Gal-1;培养上清中亦存在Gal-1;细胞免疫荧光染色同样观察到,活化PSC大量表达Gal-1。
2、50% PSC-SN干预Ins-1 24小时后,上清中胰岛素量显著减少(P< 0.01),该作用可被20mM TDG部分阻断(P<0.01),而20mM TDG对Ins-1凋亡及胰岛素分泌并无影响(P>0.05);Annexin Ⅴ-PI标记后流式细胞仪分析示50% PSC-SN诱导Ins-1凋亡率增加(P<0.01),该作用可被TDG部分抑制(P<0.01)。
3、不同浓度人重组Gal-1干预24小时呈浓度依赖性促进Ins-1凋亡(P<0.01);抑制Ins-1胰岛素表达分泌(P<0.01)。
结论:Gal-1参与介导PSC致胰岛β细胞凋亡,抑制胰岛素分泌的过程。