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目的:建立MELC体系(体外模拟混合皮肤移植模型),探讨B7-H1分子在自体角朊细胞诱导的免疫抑制中的作用和相关机制。
方法:
1.分离两只不同KM乳鼠(a,b乳鼠新生1-3日龄,无毛发生长)的淋巴细胞,表皮细胞,角朊细胞,并用细胞免疫组织化学方法鉴定角朊细胞。
2.用分离的淋巴细胞,表皮细胞,角朊细胞,建立MELC体系。引入自体角朊细胞,在体外模拟自体皮岛效应。
3.在有自体角朊细胞参与的与无自体角朊细胞参与的MELC体系中,分别混合培养12h,24h,36h后,分离角朊细胞,流式细胞术检测B7-H1的表达。同样条件下分离淋巴细胞,流式细胞术检测PD-1的表达。
4.在有自体角朊细胞参与的与无自体角朊细胞参与的MELC体系中,分别混合培养12h,24h,36h后,分离淋巴细胞,提取RNA,实时荧光定量PCR检测IL-10,Foxp3,GATA-3 mRNA的表达。
结果:
1.分离得到的淋巴细胞,表皮细胞活性好,存活率高。分离的角朊细胞纯度高,活性好,存活率高,采用细胞免疫组织化学鉴定,阳性率高。
2.原代培养的角朊细胞,表皮细胞,淋巴细胞建立的MELC体系稳定,混合培养稳定。
3.在有自体角朊细胞参与的MELC体系中,12h,24h,36h后,分离角朊细胞,流式细胞术检测B7-H1表达呈逐渐升高趋势,有显著差异(P<0.05)。同样条件下分离淋巴细胞,流式细胞术检测PD-1,表达呈升高趋势,有显著差异(P<0.05)。而无自体角朊细胞参与的MELC体系中,角朊细胞,淋巴细胞均无显著差异(P>0.05)。
4.在有自体角朊细胞参与的MELC体系中,12h,24h,36h后,分离淋巴细胞,提取RNA,实时荧光定量PCR检测IL-10,Foxp3,GATA-3的表达呈升高趋势,有显著差异(P<0.05)。而无自体角朊细胞参与的MELC体系中,无以上表达趋势,均无显著差异(P>0.05)。
结论:
1.混合皮肤移植中,自体角朊细胞可表达共刺激分子B7-H1,介导T细胞的活化,并伴随B7-H1受体PD-1在T淋巴细胞表面表达的上调。
2.MELC体系中分泌的IL-10来源于淋巴细胞,并非角朊细胞。
3.MELC体系中诱导出一群Foxp3+的调节性T细胞,负向调节免疫反应。
4.自体角朊细胞通过表达B7-H1,使Th2细胞含量升高。