As-BRE1在中国卤虫滞育胚胎重启动中的表达及功能研究

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中国卤虫(Artemia sinica)在面对恶劣的生存条件时有着非常强大的抗逆性,能够通过生产滞育卵来保证种族的延续。当再次碰到良好的生存条件时,接收到外部环境信号的卤虫卵就能结束滞育并重新恢复生长。目前,虽然对卤虫滞育的发生机制已经有了很多研究成果,但对卤虫滞育的解除机制和重启动胚胎早期发育的相关机制还知之甚少,有待于进一步深入研究。在真核生物中,组蛋白H2B的单泛素化(H2Bub1)在染色质生物结构、功能和染色质形成的动力学等方面起着关键作用,而BRE1/RAD6泛素化机制至今仍被认为是H2B单泛素化的唯一驱动者。这种修饰除了对于正确的DNA复制、修复和转录至关重要外,该过程还与多种细胞功能有关,如通过参与稳定染色体凝缩过程,进而参与胚胎发育早期的细胞周期调控等。因此,本研究选择了对BRE1及其在中国卤虫滞育胚胎重启动中的表达及功能展开了一系列实验。本研究采用RACE技术对As-bre1的序列进行克隆,首次获得了完整的As-bre1序列全长共3100bp,转录翻译得到氨基酸921个,所构成的As-BRE1是一种分子质量为107k D、不可溶的亲水性蛋白。通过q RT-PCR和WB实验,对As-bre1和最适条件下、低温胁迫条件下的As-BRE1及其相关蛋白进行了滞育打破后各发育时期表达水平的研究,结果显示:As-bre1与As-BRE1在各个时期的表达水平趋势相同,同时As-BRE1参与介导所得的As-H2BK120ub1表达水平也显示出了相同趋势,都是从滞育打破0h起表达水平开始上升,到15h达到峰值后逐渐下降并保持在一个较低的水平;当外界温度逐渐下降,As-BRE1和As-H2BK120ub1的表达水平也跟着下降。采取免疫荧光技术对As-BRE1和As-H2BK120ub1以及细胞核进行亚细胞定位,结果显示二者所存在的部位高度一致。根据As-BRE1的表达模式及其相关蛋白在打破滞育后各发育时期的表达水平变化以及它们表达部位的结果分析,本研究推测As-BRE1及其相关蛋白不属于抗低温蛋白,而是维持细胞正常生命活动的基础蛋白,并且As-BRE1及其所介导的H2B单泛素化在中国卤虫滞育胚胎重启动后的早期生长发育过程中发挥了重要功能。这项结果有利于推进中国卤虫滞育解除以及重启动胚胎早期生发育相关分子调节机制的研究,同时为BRE1可能通过介导H2B的单泛素化参与多种细胞功能调节的研究提供了有力论据。
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