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梅山猪和杜洛克猪是育种生产中常选用的优质猪种,二者繁殖性能存在显著差异,其根本原因尚未确定。有关其繁殖性能差异的探讨主要集中在两个品种间母畜的乳头数、乳房发育、公猪睾丸形态学及精子发生相关方面,而公猪精子活力等繁殖指标鲜有报道。由于哺乳动物精子是高度分化的细胞,基本上没有转录和翻译功能,而精子蛋白磷酸化修饰对于激发精子顶体反应以及维持超激活运动具有重要的意义,亦是完成精卵结合的重要保证。本研究以精子活力参数及蛋白磷酸化特性为分析测试指标,对比梅山猪和杜洛克猪精子活力和蛋白磷酸化程度的差异性,探讨二者繁殖差异性可能的诱导因素,为相关分子机制研究提供理论依据。本研究的结果如下:1、猪获能精子20KDa、25KDa、35~37KDa、55KDa的底物磷酸化水平高于未获能精子的蛋白磷酸化;猪获能精子25KDa、30~40KDa、55KDa和75KDa分子量蛋白的酪氨酸磷酸化程度也强于未获能猪精子。cAMP(1mM)和IBMX(0.1mM)能促进25KDa和55KDa分子量蛋白PKA底物磷酸化上调且表现出时间依赖性。H-89抑制猪精子25KDa~37KDa分子量和50~75KDa蛋白磷酸化,说明猪精子获能过程中蛋白磷酸化调控符合sAC/cAMP/PKA信号通路。2、PKA底物磷酸化处于上调或抑制状态时,其相对应的精子活力及VCL参数指标也呈增加或是下降趋势,结果提示猪精子获能过程中PKA底物磷酸化与精子活力具有正相关性。3、免疫荧光证实猪获能精子PKA底物磷酸化主要发生在顶体帽、顶体后端和尾部(中段、主段以及尾段);而蛋白酪氨酸磷酸化主要发生在植入窝和尾部,且中段酪氨酸磷酸化程度较高。4、梅山猪和杜洛克猪精子活力参数指标存在显著差异,梅山猪获能精子运动能力的参数VCL(212.4um/s)显著大于杜洛克猪的获能精子(195.7um/s)(P<0.05)。5、梅山猪与杜洛克猪的获能精子的蛋白PKA底物磷酸化发生时间不具有同步性,特别是与精子活力具有密切关系的270KDa蛋白磷酸化,在精子获能培养1.5小时后梅山猪精子270KDa蛋白磷酸化水平明显高于杜洛克猪精子;梅山猪获能精子150KDa蛋白酪氨酸磷酸化也强于杜洛克猪精子。本研究结果提示:梅山猪与杜洛克猪精子获能过程中PKA底物磷酸化及活力指标的差异性可能是导致两个猪种繁殖性能不同的原因之一。