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研究背景：多发性骨髓瘤（MM）在我国的发病率呈不断上升的趋势，且该病严重影响患者的生活质量和生存期。MM至今尚不能被治愈。目前采用的常规化/放疗又不能从根本上延长患者的无病生存期（DFS）及总生存期（OS）。微小残留病灶（MRD）的存在常是化疗耐药和复发的主要原因，因此迫切需要有新的治疗策略。肿瘤的免疫治疗自80年代以后有了飞跃发展。其中，以抗原特异性细胞毒T淋巴细胞介导的肿瘤的免疫治疗已成为新的热点。抗原的识别、加工、提呈以及T细胞的致敏、激活和扩增都依赖于抗原递呈细胞（APCs）的参与。目前认为树突状细胞（dendritic cells，DCs）是功能最强的专职性APCs；DCs能摄取和加工、提呈抗原，表达高水平的MHC分子、共刺激分子和粘附分子。它能够显著地刺激naive T细胞增殖，从而启动免疫反应，所以DC是比较理想的APC。因此，我们设想通过体外扩增MM患者自体DC，然后以合适的抗原冲击致敏DC以诱导MM抗原特异性CTL，为MM患者DC疫苗的临床应用打下实验基础。 目的：观察不同浓度IFNα联合GM-CSF诱导健康者及MM患者外周血单核细胞生成树突状细胞（dendritic cells，DCs）的作用，比较与健康者与MM患者的DC在形态、数量、免疫表型以及功能上的差异。研究MM患者外周血单核细胞来源的DC在MM细胞株U266细胞可溶性抗原及经丝裂霉素C处理过的U266细胞激发下体外诱导的U266特异性CTL的作用。 实验方法：从健康者外周血获得的单核细胞在GM-CSF 800u/ml加不同浓度IFNα条件下培养8天，观察形态，检测免疫表型及初步的功能测定，以选择合适的IFNα浓度；应用GM-CSF 800u/ml加IFNα600u/mL体外培养MM与健康者外周血单核细胞，8天后进行形态学、免疫表型检测和混合淋巴细胞反应；将MM患者外周血来源的贴壁单核细胞在GM-CSF/IFNα条件下利用无血清技术培养生成DC，应用丝裂霉素C处理过的U266细胞及用U266细胞制备 第二军医大学 硕士学位论文 的可溶性抗原刺激DC，然后与自体淋巴细胞共同孵育5－7天以诱导生成特异 性 CTL，来用 My法检测对 UM细胞的杀伤效果。 实验结果：MM ＄者与健康者志愿者外周血单核细胞在 GM－CSF 800ullnl 联合 IFN a 60… r下（IFN a 600ultnl为最合适的浓度）培养 8天后生成 具有典型特征的DC，高度表达MllC皿类分子、共刺激分于CD40、CD86以及 粘附分于(添85％人CD14的阳性表达低于10o／o，但CD83阳性表达比较低0．！ 土2．2％人两者在数量、兔疫表型阳性率上无显著差异(p0．05入而且同样能 强烈激发同种 T淋巴细胞槽殖。应用 My法检测 UW细胞及其可溶性抗原激 发的DC诱导特异性CTL对靶细胞U266的杀伤率分别为ZI．2土5．个瓜和28．0土 76％，对照组未经抗原刺激 DC组分别为 1！．7土4．3％gu 9．5土3．8％(p＜0．ofh 而不加DC介导以抗原直接刺激自体淋巴细胞组为15．6土4．8o和13．l士5．5o， (P＜0．of人实验显示 Ue细胞及其可溶性抗原成分激发的 DC与自体淋巴细胞 孵育能诱导出Ue特异性C几。本研究进一步证实了MM患者的DC介导特异 性抗瘤作用是有效的。