论文部分内容阅读
仔猪腹泻是困扰养猪业的难题,而中兽医学对仔猪腹泻的辨证施治相关研究较少。本文以中兽医学理论为基础,探讨湿热泄泻对仔猪肠道的损伤,寻找治疗仔猪湿热泄泻的方药及其作用机理,试图解决以下问题:加味葛根芩连汤治疗仔猪湿热泄泻的分子作用机制,葛根素等中药活性成分调控仔猪黄痢体外模型中猪肠道上皮细胞(IPEC-J2细胞)的分子机理,以及热邪诱导湿热泄泻在氧化应激方面的致病机制。试验一:本试验通过灌服加味葛根芩连汤治疗湿热泄泻的仔猪,探讨其治疗湿热泄泻仔猪的作用机制。结果显示,湿热泄泻严重破坏了仔猪的小肠和结肠结构,尤其是十二指肠和空肠。湿热泄泻致使仔猪十二指肠分泌大量黏液,隐窝PCNA表达量升高,空肠TLR4介导的炎症反应被激活。相比于湿热泄泻组,加味葛根芩连汤组的十二指肠、空肠、回肠和结肠的组织结构得到显著改善,空肠炎症反应程度降低。结果表明,加味葛根芩连汤通过促进隐窝干细胞的增殖和分化、降低湿热泄泻仔猪空肠炎症反应以维持肠道结构完整性。试验二:本试验通过检测ETEC毒力基因表达量探讨中药活性成分葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱对ETEC生长曲线及分泌毒素的影响;通过ETEC感染IPEC-J2细胞建立仔猪黄痢体外模型,探讨葛根素等药物对IPEC-J2细胞的形态学及黏附蛋白基因的调控作用。结果表明,葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱对细菌的生长有一定的抑制作用并干扰了毒素的分泌。葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱通过改善细胞微观形态结构,降低ETEC对细胞的黏附以保护IPEC-J2细胞。试验三:本试验通过ETEC感染IPEC-J2细胞建立仔猪黄痢体外模型,探讨该模型ETEC对IPEC-J2细胞凋亡和炎症的损伤,以及葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱对IPEC-J2细胞在凋亡和炎症反应功能的调控。结果显示,ETEC感染显著升高了 IPEC-J2细胞的凋亡率,但葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱并未显著降低IPEC-J2细胞的凋亡率。ETEC感染细胞后,IκBα蛋白开始降解,核内P65和P-P65荧光表达量显著升高,炎性因子mRNA表达量显著升高,表明ETEC激活了IPEC-J2细胞的NF-κB信号通路。相比于ETEC感染组,黄芩苷和盐酸小檗碱预处理IPEC-J2细胞后,核内P-P65荧光表达量显著降低,炎性因子mRNA表达量显著降低。表明,黄芩苷和盐酸小檗碱可以通过抑制IPEC-J2细胞的NF-κB信号通路降低IPEC-J2细胞的炎症反应。试验四:本试验通过热邪(高温)诱导大鼠肠道上皮细胞(IEC-6细胞)构建热邪(高温)模型,探讨热邪(高温)处理对IEC-6细胞氧化应激反应的影响。结果显示,热邪(高温)破坏了 IEC-6细胞的形态结构,导致细胞氧化应激反应增加并改变了 Nrf2-Keap1信号通路的相关基因和蛋白。结果表明,热邪(高温)通过Nrf2-Keap1信号通路调节IEC-6细胞的氧化应激反应。综上,加味葛根芩连汤通过促进肠道上皮细胞的增殖、抑菌和降低炎症反应等方式有效治疗仔猪湿热泄泻,热邪(高温)导致肠道氧化应激。