【摘 要】
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目的:通过建立咳嗽变异性哮喘豚鼠模型,观察朝医方麻黄定喘汤对咳嗽变异性哮喘豚鼠气道炎症的影响,探讨其作用机制是否与NLRP3信号通路有关。方法:选取50只雄性豚鼠随机分为正常组、OVA组、麻黄定喘汤低剂量组（5g/kg）、麻黄定喘汤高剂量组（20g/kg）和地塞米松组（0.5mg/kg）,每组10只。将豚鼠饲养一周后,除正常组外其余组前29天均进行烟熏,并在第15、22日给予4%OVA肌注和2%A
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目的:通过建立咳嗽变异性哮喘豚鼠模型,观察朝医方麻黄定喘汤对咳嗽变异性哮喘豚鼠气道炎症的影响,探讨其作用机制是否与NLRP3信号通路有关。方法:选取50只雄性豚鼠随机分为正常组、OVA组、麻黄定喘汤低剂量组（5g/kg）、麻黄定喘汤高剂量组（20g/kg）和地塞米松组（0.5mg/kg）,每组10只。将豚鼠饲养一周后,除正常组外其余组前29天均进行烟熏,并在第15、22日给予4%OVA肌注和2%AL（OH）3腹腔注射致敏,第29日起进行1%OVA溶液雾化激发四周建立咳嗽变异性哮喘（CVA）豚鼠模型。每次激发前30分钟给予药物灌胃治疗,OVA组以同等剂量的生理盐水代替。末次给药后辣椒素气溶胶激发记录咳嗽次数及咳嗽延迟时间,评估豚鼠的气道高反应性;次日处死豚鼠取肺泡灌洗液（BALF）进行Diff-Quik染色观察炎症细胞并计数;肺组织进行HE、PAS、Masson染色观察肺组织病理变化和caspase-1活性检测;ELISA法检测BALF中相关细胞因子的含量;Western blot法检测肺组织中NLRP3、caspase-1、ASC、IL-18、IL-1β蛋白表达水平;免疫组织化学法和免疫荧光法观察NLRP3在气道周围的分布。结果:1.麻黄定喘汤对豚鼠咳嗽延迟时间和次数的影响:与正常组相比,OVA组提前出现咳嗽反射且次数增加,与OVA组相比,麻黄定喘汤各剂量组和地塞米松组咳嗽发作时间和咳嗽次数均有不同程度改善。2.麻黄定喘汤对BALF中炎症细胞计数和相关因子表达的影响:与正常组相比,OVA组BALF中炎症细胞数增长显著,细胞因子（IL-1β、IL-18、IL-17A、IL-22、IL-23）含量升高,与OVA组相比,余治疗组BALF中炎症细胞计数减少且细胞因子（IL-1β、IL-18、IL-17A、IL-22、IL-23）含量显著降低。3.HE染色结果:OVA组支气管炎症细胞浸润,肺泡组织破坏,有塌陷、扩张现象;与OVA组相比,麻黄定喘汤各剂量组和地塞米松组对上述情况均有明显治疗作用。4.PAS染色结果:OVA组杯状细胞和黏液分泌增多;麻黄定喘汤各剂量组和地塞米松组不同程度减少了阳性细胞计数和黏液的分泌。5.Masson染色结果:OVA组可见气道平滑肌增厚,有大量的胶原沉积现象;与OVA组相比,麻黄定喘汤各剂量组和地塞米松组气道胶原沉积和平滑肌增厚现象减轻。6.Western blot结果:与正常组相比,OVA组肺组织中NLRP3、caspase-1、ASC、IL-18、IL-1β蛋白表达水平升高;与OVA组相比,麻黄定喘汤各剂量组和地塞米松组不同程度下调了肺组织中NLRP3、caspase-1、ASC、IL-18、IL-1β蛋白表达水平。7.免疫组织化学结果:与正常组相比,OVA组气道周围大量细胞被染成棕黄色;与OVA组相比,麻黄定喘汤各剂量组和地塞米松组黄棕色细胞均减少。8.免疫组织荧光结果:与正常组相比,OVA组NLRP3荧光强度显著增强;与OVA组相比,麻黄定喘汤各剂量组和地塞米松组NLRP3荧光强度明显减弱。9.caspase-1活性检测结果:与正常组相比,OVA组出现caspase-1活性升高现象;与OVA组相比,麻黄定喘汤各剂量组和地塞米松组caspase-1的活性均有显著减弱。结论:1.咳嗽变异性哮喘豚鼠存在气道炎症和气道重塑,NLRP3蛋白表达水平与正常豚鼠相比显著升高。2.麻黄定喘汤能够有效减少咳嗽变异性哮喘豚鼠的咳嗽次数,延迟咳嗽发作时间,其作用机制可能通过抑制NLRP3炎症小体的活化从而改善咳嗽变异性哮喘豚鼠的气道炎症。3.麻黄定喘汤高剂量组治疗效果优于麻黄定喘汤低剂量组,抑制NLRP3炎症小体的活化和Th17细胞相关因子释放效果最佳。
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