环境因子及抗生素对共培养的萱藻(Scytosiphon lomentaria)丝状体和膨胀色球藻(Chroococcus turgidus)生长的影响

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萱藻Scytosiphon lomentaria(Lyngbye.)Link隶属于褐藻门(Phaeophyta),褐子纲(Phaeosporeae),萱藻科(Scytosiphonaceae),萱藻属(Scytosiphon),系世界广布性海藻种类,北起波罗的海,南至澳大利亚、智利沿海均有分布。萱藻在我国广泛分布于北起辽东半岛,南至广东省海陵岛之间的海域,常生长于中、低潮带的池沼和岩石上。萱藻具有异形世代交替的生活史,配子体世代为宏观的叶状体,管状,藻体黄褐至深褐色,自然条件下可生长至高15-70厘米,直径2-5毫米;孢子体世代有微观的丝状体、垫状体和类垫状体三种形态,丝状体、垫状体和类垫状体之间可以相互转化。其中丝状体因具有生物性状稳定、扩增速度快等优点而成为萱藻种质保存和人工育苗的材料。萱藻味道鲜美,营养价值极高,是优质的海洋蔬菜,广受中日韩等国沿海居民的喜爱。除食用价值外,萱藻还兼具极高的药用价值,所含活性成分在抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、抗细菌等方面也表现出较大的优势。此外,萱藻作为一种大型海藻,同时具备了抗污、除氮磷等生态修复能力。总之,萱藻是一种极具栽培潜力的新型优质海藻资源。丝状体扩增、诱导丝状体产生单室孢子囊以及孢子采苗是实施萱藻人工育苗的基本环节,其中快速扩增以获取足量的萱藻丝状体尤为重要。而丝状体扩增过程中易受杂藻污染,若控制不力,会对育苗工作造成巨大损失。萱藻丝状体在扩增过程中易被膨胀色球藻(Chroococcus turgidus)污染,该藻隶属于蓝藻门(Cyanophyta),系原核生物,因具有繁殖速度快,竞争能力强的特点,而会对萱藻丝状体的生长发育和扩增速度产生不利影响,甚至给萱藻育苗造成毁灭性损失。国内外对膨胀色球藻的研究鲜有报道,本文研究了膨胀色球藻生物学特性,通过构建萱藻丝状体和膨胀色球藻的共培养体系,研究了环境因子的改变以及五种常见抗生素对两种藻类生长的影响,旨在探讨膨胀色球藻污染对萱藻丝状体生长的影响,以及可以有效抑制、去除共培养体系中膨胀色球藻的方法,从而降低萱藻种质保存和扩增过程中丝状体被色球藻污染的风险,为萱藻的人工育苗提供保障。本文研究结果如下:1、膨胀色球藻对光温条件以及氮磷浓度均有较宽的适应范围:(1)低光强(14.4μmol/(m2·s))对膨胀色球藻的生长产生抑制作用,在[43.2-100.8μmol/(m2·s)]范围内膨胀色球藻生长状况最好;(2)光周期对膨胀色球藻的生长影响较小,14L:10D条件下膨胀色球藻的日均增长率最高;(3)在实验设置的温度范围(4.0-24.0℃)内,膨胀色球藻的日均增长率与温度成正相关,其生长的最适温度范围为16.0-24.0℃;(4)膨胀色球藻生长的最适氮(NaN03)浓度为50.0mg/L,1.0mg/L条件下其日均增长率低至1.32%,生长受到显著抑制;(5)膨胀色球藻生长的最磷(NaH2PO4)浓度范围为5.0-10.0mg/L,0.1mg/L条件下其日均增长率降至4.09%,抑制作用明显。2、在萱藻丝状体和膨胀色球藻的共培养体系中,膨胀色球藻对环境的适应能力更强,始终占据优势,不利于萱藻丝状体的生长和扩增:(1)膨胀色球藻对光强的适应范围比萱藻丝状体更宽,萱藻丝状体在低光强[14.4μmol/(m2·s)]和高光强[129.6μmol/(m2·s)]条件下生长均受到抑制,而膨胀色球藻只被低光强[14.4μmol/(m2·s)]抑制;(2)光周期对两种藻的生长影响相对较小,萱藻丝状体的生长在8L:16D条件下受到抑制,而膨胀色球藻在各光周期条件下日均增长率始终高于14.00%;(3)低温(8.0℃C)和高温(24.0℃)均抑制萱藻丝状体的生长,而膨胀色球藻始终具有良好的生长状况,且其日均增长率与温度成正相关;(4)低氮(NaNO3)浓度(30mg/L)同时限制了两种藻的生长,但萱藻丝状体受到的抑制作用较强,生长状况较差,膨胀色球藻因此占据优势:(5)较低的磷(NaH2PO4)浓度(1mg/L、2mg/L)限制了膨胀色球藻的生长,同时对萱藻丝状体生长也产生显著抑制。3、红光有利于萱藻丝状体和膨胀色球藻的生长,其中膨胀色球藻细胞绿色色素加深,可能与红光能够提高叶绿素和藻胆蛋白的含量有关;蓝光对膨胀色球藻的生长速度产生了不利影响,同时也降低了萱藻丝状体的日均增长率;绿光对两种藻的生长都有明显的抑制作用,绿光条件下两种藻生长速度最慢且藻细胞状态差。4、不同抗生素对共培养的萱藻丝状体和膨胀色球藻生长的影响存在差异:(1) 100μg/mL的链霉素可以显著抑制膨胀色球藻生长,而不影响萱藻丝状体的生长;(2)氨苄青霉素和庆大霉素对膨胀色球藻产生明显抑制作用的浓度均为100μg/mL,对萱藻丝状体产生抑制作用的浓度分别为100μg/mL和500μg/mL; (3) 100μg/mL卡那霉素可强烈抑制膨胀色球藻的生长,而萱藻丝状体没有受到抑制;(4)氯霉素对膨胀色球藻和萱藻丝状体均有较强的抑制作用,10μg/mL可以对膨胀色球藻的生长产生显著抑制而不抑制萱藻丝状体的生长,浓度达到50μg/mL后,萱藻丝状体生长开始受到抑制。综上所述,链霉素(100μg/mL)、卡那霉素(100-200μg/mL)和氯霉素(10μg/mL)可以用于降低萱藻种质保存和扩增过程中萱藻丝状体被色球藻污染的风险。
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