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以7份辣椒(CapsicumannuumL.)种质为材料,使用SDS法、CTAB法和高盐低pH法对其叶片基因组DNA提取方法进行了筛选。以原产地为湖南、四川、江西、海南、广东、吉林等省份的52份辣椒地方资源为材料,在建立高效快速的ISSR分析技术体系的基础上,对其进行ISSR分析,以评价我国辣椒地方资源的遗传多样性,分析其亲缘关系,为应用地方品种资源的杂种优势提供依据。主要试验结果如下:
1.使用SDS法、CTAB法和高盐低pH法对辣椒(CapsicumannuumL.)叶片基因组DNA进行提取,经过检测,SDS法是辣椒基因组DNA提取的最佳方法。
2.经过优化,确定PCR反应采用20μL体系,其中模板2μL;10×Buffer3μL;引物1.5μL;10mMdNTP0.15μL;taqE酶0.75μL;补ddH2O至20μL。PCR反应程序为:95℃预变性5min,95℃变性30s,50℃退火30s,72℃延伸2min30s,进行40个循环,最后72℃延伸7min,4℃保存。
3.从60条ISSR引物中筛选了效果好的11条引物。
4.在52个供试材料中,11个ISSR引物共扩增出98条带,其中多态性条带数为89条,多态性率90.8%,其中扩增条带最多的引物为UBC834,共扩增出16条;最少的为UBC844,仅有3条。
5.依据遗传相似系数进行聚类分析,在D=0.80时,所构建的树状聚类图将供试材料分为3大类,第一大类为长椒、簇生椒和圆锥椒;第二大类为灯笼椒和圆锥椒;第三大类为湛江野山椒和梅州朝天椒,这种分类基本符合传统的形态学分类方法。
6.在不考虑湛江野山椒和梅州朝天椒这两个材料的前提下,其余50个材料遗传相似系数在0.79~1之间,遗传基础相对比较窄,这可能和辣椒单一的起源中心有关。
7.湛江野山椒和梅州朝天椒与其它供试材料亲缘关系较远,遗传相似系数为0.34,达到了辣椒属种间的遗传距离,疑为野生种。