论文部分内容阅读
1.研究目的: 1.1 建立小鼠FLV感染模型,以抗逆转录病毒药物AZT作为对照药,通过对该小鼠模型的脾指数,脾脏病理切片等指标分析,初步探讨毛冬青对逆转录病感染的治疗作用,并评价其对FLV所致脾大症的保护作用。 1.2 建立小鼠FLV感染模型,以抗逆转录病毒药物AZT作为对照,通过对该小鼠模型的CD4T、CD8T、CD4T/CD8T等指标分析,初步探讨毛冬青对逆转录病感染后机体的CD4T,CD8T,以及CD4T/CD8T的影响作用,并评价其效果,并初步分析其作用的机制。 1.3 建立小鼠FLV感染模型,以抗逆转录病毒药物AZT作为对照,通过对小鼠血清IL-1β,IL-2,IL-6及INF-γ的测量,探讨毛冬青对逆转录病毒感染的作用机制,及其对免疫系统的调控机制,评价其效果,为进一步认识和发掘该药,并将来应用治疗逆转录病毒感染提供实验依据和可靠数据。 1.4 以合适浓度FLV脂质体感染PA317（鼠胚肾成纤维细胞-逆转录病毒包装细胞）,传代5次后获得稳定的表达FLV的PA317-FLV株。并以RT-PCR法鉴定该细胞株的表达。以NIH3T3细胞作为效应细胞检验MDQ作用后PA317-FLV细胞所产生的病毒的效价。以MDQ作用于PA317-FLV细胞,在激光共聚焦显微镜下观察MDQ作用前后PA317-FLV钙离子通道的变化情况,探讨MDQ作用于PA317-FLV的分子水平的作用机制。 2.研究方法: 2.1 实验动物造模及指标检测: 小鼠适应性喂养1目后,腹腔注射0.4ml×10-1FLV病毒原液攻毒后,随机分为空白对照组（简称KB组）、MDQ高剂量组（简称MG组）、MDQ中剂量组（简称MZ组）、MDQ低剂量组（简称MD组）、AZT组每组10只。常规喂养。攻毒当日开始灌胃口服给药。正常对照组口服灌胃生理盐水0.4ml/只/日。MDQ组分别给予相当于60kg体重的成人每日每公斤用药量的5倍（含生药2.166g/kg）、10倍（含生药4.33g/kg）和20倍（含生药8.67g/kg）剂量灌胃;模型组灌以等量生理盐水;AZT组按100mg/kg体重灌胃,每天按时喂药,连续21天。每组小鼠按0.4ml/只/日进行给药。所有体内实验小鼠于21天时摘眼球取血处死。 2.2 脾指数的测定: 小鼠摘眼球处死前称体重,以眼科剪,沿腹部正中线剪开腹腔,在横隔左侧可见脾脏,钝性分离脾脏,清除脂肪结缔组织,鼠脾称湿重,按以下公式计算脾指数脾指数=脾重/体重×100%。称重完成后将脾脏剪成5mm厚度的小块放入