喹噁啉类药物(Quinoxalines)是一类具有喹噁啉-1，4-二氧化物基本结构的人工合成的抗菌促生长药物，主要包括卡巴氧(Carbadox)、喹乙醇(Olaquindox)、喹赛多(Cyadox)、乙酰甲喹(Mequindox)等。之前的研究表明喹噁啉药物的毒性与脱氧代谢有密切且复杂的关系，如喹乙醇虽具有遗传毒性，但是其脱氧代谢物没有遗传毒性，但是另有试验发现卡巴氧与其脱二氧代谢物均具有致畸变和致癌性。喹赛多与同类药物相比，安全性高、副作用小、用药吸收快，作为安全性更高的新研发药物，将能够替代传统喹噁啉类药物用于临床当中。为了更全面的检测喹赛多的安全性，本课题进行了喹赛多主要的三种脱氧代谢物N4-脱一氧(Cy2)、N1-脱一氧(Cy10)、N1，4-脱二氧代谢物(Cy1)的毒理性研究，为喹赛多申报和口后的生产使用提供参考资料。　　1、急性毒性试验　　各选用52只雌雄SPF级Wistar大鼠和78只Balb/c小鼠，雌雄各半。由于N1和N4脱一氧代谢物在制备过程中难以分离纯化到足够的大鼠灌胃量，因此大鼠是分别经口灌喂N1和N4喹赛多脱一氧混合物(1∶2)以及脱二氧代谢物混悬液染毒，Balb/c小鼠分别经口灌喂N1-脱一氧、N4-脱一氧、N1，4-脱二氧代谢物混合液染毒。首先使用上下法(Up and down method)中5000mg/kg剂量水平的限度试验，先将受试物给予雌雄大鼠和小鼠各一只，每只5000mg/kg b.w.，该鼠存活，再将受试物给予另外2只大鼠和小鼠，也都存活，结果表明，各代谢物在大鼠和小鼠的LD50均大于5000mg/kg，随后又进行了最大给药法的急性毒性实验，以测定喹塞多三种代谢物的最大耐受量。结果表明，Wistar大鼠口服喹赛多脱一氧混合物以及脱二氧代谢物的最大耐受量(MTD)均为6000mg/kgb.w.。N1-脱一氧、N4-脱一氧、N1，4-脱二氧代谢物在Balb/c小鼠的MTD均是6000mg/kg b.w.。喹赛多三种脱氧代谢物的急性毒性分级为无毒。　　2、遗传毒性试验　　细菌回复突变试验试验选用鼠伤寒沙门氏菌株包括TA97a，TA98，TA100，TA102和TA1535，N1-脱一氧代谢物剂量分别为2.5、1.25、0.625、0.312和0.156 mg/皿，N4-脱一氧代谢物剂量分别为1.25、0.625、0.312、0.156和0.078 mg/皿，N1，N4-脱二氧代谢物剂量分别为5、2.5、1.25、0.625和0.312 mg皿，同时不同菌株设有相应的阳性对照组（其细菌回复突变数均是溶剂对照组的2倍以上）和溶剂对照组(DMSO，416μ L)，在加和不加S9代谢活化系统条件下检测受试物对5株细菌的致突变性。试验采用平皿掺入法，计数各皿的回复突变菌落数，得出各剂量组与阴性对照组回变菌落数比值。结果显示，在加与不加S9代谢活化系统的条件下，三种代谢物在所试验的剂量范围内，所引起各菌株的回变菌落数与阴性对照组的比值均小于2，结果均为阴性。说明N1-脱一氧、N4-脱一氧、N1，4-脱二氧代谢物在本试验条件下均无致突变性。　　小鼠骨髓细胞微核试验选用7-12周龄SPF级的Balb/c小鼠(110只)随机分组，每组雌雄各5只，N1-脱一氧、N4-脱一氧、N1，4-脱二氧代谢物的剂量均设置3组，浓度均为1.25、2.5和5 g/kg b.w.，同时设置阴性和阳性对照组(环磷酰胺，40mg/kgb.w.)。采用30小时内经口染毒2次（阳性对照组为一次性腹腔注射），2次给药间隔24 h，第二次给药6h后，小鼠脱颈椎处死，采集股骨骨髓制片染色，最后镜检。每只动物计嗜多染红细胞(PCE)1000个，计算含微核的嗜多染红细胞(MNPCE)数。在计数PCE时，须要计数所见到的正染红细胞(NCE)，并求出PCE/NCE的比值。结果显示，与阴性对照组相比，N1-脱一氧、N4-脱一氧、N1，4-脱二氧代谢物的各剂量组微核发生率没有显著上升（p＞0.05）。说明N1-脱一氧、N4-脱一氧、N1，4-脱二氧代谢物在体内微核试验的结果均是阴性，不具有体内致突变性。　　体外细胞染色体畸变试验选择中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)作为该试验的对象，N1-脱一氧代谢物的剂量分别为30、15和7.5μg/mL; N4-脱一氧代谢物剂量分别为17、8.5和4.25μg/mL; N1，4-脱二氧代谢物的剂量分别为76、38和19μg/mL，同时设阴性和阳性对照组(不加S9的为丝裂霉素(MMC)0.2μg/mL和加S9的为环磷酰胺(CP)50.0μg/mL)。试验分别在加和不加S9代谢活化系统的条件下进行。在不加S9时，受试物分别作用6h、12h和18h;在加S9的条件时，受试物作用6h，细胞培养24 h后制片。各剂量组观察200个中期分裂相细胞，计算其中的细胞染色体畸变率。试验结果显示，N1-脱一氧、N4-脱一氧、N1，4-脱二氧代谢物的各自剂量组在加与不加S9的细胞畸变率同阴性对照组比较，均没有显著性增高(p＞0.05)，且畸变率均小于5％，判定结果为阴性。表明N1-脱一氧、N4-脱一氧、N1，4-脱二氧代谢物在本试验中不会引起V79细胞染色体畸变。　　3、大鼠90天喂养试验　　选用6-8周龄SPF级Wista大鼠(280只)作为试验动物，通过混饲方式染毒13周，最高剂量组以及空白对照组有2周恢复期，喹赛多脱一氧混合物和脱二氧代谢物剂量设置均为0、50、150和2500 mg/kg饲料，另外设喹赛多2500 mg/kg组为对照组。空白对照组、喹赛多2500 mg/kg组、喹赛多脱一氧混合物和喹赛多脱二氧代谢物的2500 mg/kg组每组雌雄各20只;脱一氧混合物和脱二氧代谢物的50和150mg/kg饲料组每组雌雄各15只，饲养条件符合国际动物福利规定。每日观察并在每周固定时间对大鼠体重以及饲料剩余称量，计算大鼠的摄食量和饲料利用率。分别在试验45天和90天宰杀各组雌雄大鼠各5只和10只，取血样进行血液学和血清生化指标检验，尸体作病理剖检，主要脏器称重并制作组织病理学检查。90天后剩余的各组大鼠饲喂空白饲料，两周恢复期后作上述同样处理。试验结果显示，在喹赛多脱一氧代谢物混合物和脱二氧代谢物以及喹赛多的2500 mg/kg饲料组的雌雄大鼠体重显著低于空白组(p＜0.05），喹赛多脱二氧代谢物2500 mg/kg饲料组雄性大鼠肝脏、肺脏、肾脏、脑和睾丸（带附睾）的脏体比显著大于空白对照组(p＜0.05）;喹赛多2500 mg/kg饲料组的雄性大鼠的肺脏、脑和睾丸（带附睾）的脏体比显著大于空白对照组(p＜0.05);喹赛多脱二氧代谢物2500 mg/kg饲料组雌性大鼠肝脏、脑和脾脏的脏体比显著小于空白对照组(p＜0.05);另外，喹赛多2500 mg/kg组雌性大鼠的脑脏体比也显著小于空白对照组(p＜0.05）。血常规和血清生化检验结果显示在雄性大鼠中，与空白组相比，喹塞多及其脱二氧代谢物2500 mg/kg饲料组的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平显著升高(p＜0.05）;在雌性大鼠中，喹塞多2500 mg/kg组及其脱二氧代谢物150 mg/kg、2500 mg/kg饲料组的白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平显著升高(p＜0.05)。组织病理学检查的结果发现，喹赛多以及其脱一氧代谢物混合物和脱二氧代谢物的2500 mg/kg高剂量组大鼠的主要病理变化是肝脏门管区出现不同程度的炎性细胞浸润，脱一氧代谢物混合物高剂量组大鼠每天实际摄入药物量分别为174.89±67.33 mg/kg b.w.，脱二氧代谢物高剂量组大鼠是183.49±70.86 mg/kgb.w.，喹赛多每天的实际摄入药物量是193.44±73.32 mg/kg b.w.。综合各项指标结果表明，脱一氧代谢物混合物以及脱二氧代谢物对Wistar大鼠亚慢性毒性作用的靶器官为肝脏，脱一氧代谢物混合物的最大未观察到毒害作用剂量(NOAEL)为10.51mg/kg b.w.; N1,N4-脱二氧代谢物的NOAEL为10.62 mg/kg b.w.。　　本课题完成了喹赛多三种脱氧代谢物的急性毒性、遗传毒性、亚慢性毒性试验，得到了脱一氧代谢物的混合物、脱二氧代谢物的NOAEL，确定了喹赛多脱氧代谢物毒性作用的靶器官，证实了这三种脱氧代谢物不具有致突变性。所有试验均参考国内外相关的权威指南，并结合药物的自身特点合理选择试验组合，本研究成果可为喹赛多及其脱氧代谢物的毒性关系以及喹赛多临床研究提供相关的科学资料，并说明喹赛多经过脱氧代谢后，其相关毒性均有所减小。