猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis,Mhr）是猪上呼吸道常见病原体,临床感染率极高,在一定条件下可引发多发性浆膜炎（心包炎、胸膜炎和腹膜炎）、关节炎、肺炎、中耳炎等多组织炎症,严重影响经济收益。同时,Mhr被发现与胃癌等多种人类肿瘤有关,可诱导肿瘤细胞迁移、侵袭能力增强和耐药,具有潜在的公共卫生威胁。本实验室前期数据及文献报道提示Mhr形成全身系统性感染在其致病过程中起关键作用,但Mhr突破屏障形成全身感染的具体机制有待阐明。本论文研究了Mhr劫持宿主纤溶系统帮助自身降解细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）屏障的能力,并探讨了两种Mhr蛋白热休克蛋白DnaK和热不稳定延伸因子（Elongation factor unstable,EF-Tu）在菌体表面的兼职功能及其作为纤溶酶原受体（Plasminogen receptor,PlgR）在Mhr劫持纤溶系统突破ECM屏障中的作用。主要研究内容及结果如下:1.Mhr可劫持宿主纤溶系统水解并穿越ECM屏障:首先通过试验发现Mhr可结合多种ECM成分,包括纤连蛋白、层黏连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白及玻连蛋白;然后利用间接免疫荧光和ELISA方法定性、定量法检测发现Mhr可结合纤溶酶原（Plasminogen,Plg）至菌体表面;利用底物水解试验证明Mhr表面结合的Plg可被宿主Plg激活剂（tPA）活化为具有蛋白水解能力的纤溶酶（Plm）,但Mhr本身不能直接活化Plg;进一步采用Transwell模型证明经Plg和tPA处理的Mhr可有效水解ECM,穿越ECM胶层屏障。2.DnaK蛋白作为Mhr表面PlgR之一帮助Mhr劫持纤溶系统,并具有黏附细胞、结合ECM功能:首先构建了表达rDnaK的重组大肠杆菌,表达纯化获得重组蛋白rDnaK,制备特异性高免兔血清;然后利用菌落免疫杂交和流式细胞术试验证明DnaK可在Mhr菌体表面表达;通过ELISA方法定量检测发现rDnaK蛋白可结合Plg,该结合可以被ε-氨基己酸竞争性抑制,利用底物水解试验证明rDnaK蛋白结合的Plg可被tPA活化为Plm,进一步研究显示rDnaK蛋白对Plg的活化过程具有促进作用,由此证明DnaK为Mhr表面的PlgR之一;通过间接免疫荧光和微孔板黏附试验证明rDnaK蛋白可以黏附猪源PK-15细胞和人源NCI-H292细胞,为Mhr黏附因子之一,同时rDnaK蛋白还可以结合多种ECM成分。3.EF-Tu蛋白作为Mhr表面PlgR之一帮助Mhr劫持纤溶系统,并具有黏附细胞、结合ECM功能:首先构建了表达rEF-Tu的重组大肠杆菌,表达纯化获得重组蛋白rEF-Tu,制备特异性高免兔血清;然后利用膜蛋白Western blot、菌落免疫杂交和流式细胞术试验证明EF-Tu可表达于Mhr菌体表面;通过ELISA方法定量检测发现rEF-Tu蛋白可结合Plg,该结合可以被ε-氨基己酸竞争性抑制,利用底物水解试验证明rEF-Tu蛋白结合的Plg可被tPA活化为Plm,进一步研究证明rEF-Tu蛋白对Plg活化过程具有促进作用,由此证明EF-Tu亦为Mhr表面的PlgR之一;通过间接免疫荧光和微孔板黏附试验证明rEF-Tu蛋白可以黏附猪源PK-15细胞和人源NCI-H292细胞,也为Mhr的另一种黏附因子,同时rEF-Tu也可以结合多种ECM成分。综上所述,本研究结果证明Mhr可以结合Plg利用宿主纤溶系统帮助自身水解突破ECM屏障,进一步研究发现DnaK和EF-Tu为两种Mhr表面PlgR,参与Mhr劫持纤溶系统,同时两者还具有黏附细胞和结合ECM的兼职功能,为多功能兼职蛋白,为后续全面鉴定Mhr的PlgR及研究其与纤溶系统的互作奠定了基础。本研究为解析Mhr系统性感染的相关机制提供了新的思路,也为Mhr致病机制的阐释和相关疫苗研发提供了重要参考。