蒽及苯并芘的体外DNA相互作用与消除机理的初步研究

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本文选取蒽(ANT)和苯并芘(BaP)作为研究对象,通过多种分析方法分别探究了两者与DNA的体外相互作用模式和作用强度,以及不同环境因素对BaP和DNA体外相互作用的影响,从而建立一种利用DNA选择性俘获消除BaP的方法,具体实验结果如下:(1)紫外-可见光谱结果表明,ANT和BaP分别与DNA形成了新的复合物。DNA熔点测定结果表明,ANT和BaP的嵌入作用提高了DNA双螺旋结构的稳定性,使得DNA的熔点温度分别提高了9.9℃和12.7℃。CD光谱实验中DNA的两个CD信号峰发生改变,说明ANT和BaP的嵌入作用破坏了DNA碱基之间的相互作用。荧光光谱实验中,DNA能有效地猝灭ANT和BaP的荧光强度。荧光显微镜观察的实验中,以溴化乙锭(EB)为对照组,实验结果表明ANT、BaP和EB一样具有嵌入DNA的能力。以上研究结果表明,ANT、BaP与DNA的体外结合模式是嵌插结合。结合动力学分析结果表明,ANT、BaP与DNA相互作用的猝灭过程分别为动静态联合猝灭和静态猝灭。热力学数据表明,范德华力和氢键是结合过程的主要驱动力,并且是自发进行的。室温条件下,两者的DNA结合饱和值分别为0.76和1.18,BaP插入DNA的能力更强。(2)BaP与DNA相互作用的最适温度和p H值分别为35℃和p H 7.40,此时的DNA结合饱和值为1.41。在最适条件下,NaCl的加入使得BaP-DNA体系的DNA结合饱和值减少,其余因素(CaCl2、十二烷基磺酸钠、葡萄糖、维生素C、尿素、赖氨酸、亮氨酸)均使得DNA结合饱和值增大,表明其有利于BaP与DNA的体外相互作用。(3)DNA俘获消除BaP的结果表明,当DNA的用量为0.78×10-3 mg时,对初始浓度为5.63×10-5 mol/L的BaP去除率达到97.66%。体系中NaCl的存在降低了BaP的去除率,其他因素(CaCl2、十二烷基磺酸钠、葡萄糖、维生素C、尿素、赖氨酸和亮氨酸)均使得BaP去除率变大,该实验中磁珠具有很好的重复使用性。以上研究结果表明,ANT、BaP与DNA的体外结合模式皆为嵌插结合,并且相较于ANT,BaP具有更强的插入DNA的能力。通过改变反应条件和添加各种有助于BaP与DNA嵌插结合的环境因素,使得BaP的去除率得到提高,为基于PAHs-DNA嵌插结合俘获消除环境中的PAHs提供参考。
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