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目的：构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E2基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16E2，将其与IL-12真核表达载体pcDNA3.1(+)/IL-12联合免疫BALB/c小鼠，检测小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平，为HPV16诱发的宫颈癌治疗性核酸疫苗的研制奠定实验基础。方法：(1)用PRIMER5.0软件设计HPV16E2基因引物，PCR扩增HPV16E2基因，经EcoR I、Xho I或Not I双酶切后连至载体pcDNA3.1(+)或pGEX-6P-1，构建真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16E2和原核表达载体pGEX-6P-1/HPV16E2，并进行序列分析。(2)将质粒pcDNA3.1(+)/HPV16E2转染HeLa细胞，利用RT-PCR或Western-blot检测HPV16E2mRNA或蛋白表达。将质粒pGEX-6P-1/HPV16E2转化E.coliBL21，用IPTG进行诱导表达，纯化表达产物，Western-blot检测GST-HPV16E2纯化产物。(3)40只6W龄雌性BALB/c小鼠随机分成PBS空白组、pcDNA3.1(+)空质粒组、pcDNA3.1(+)/IL-12组、pcDNA3.1(+)/HPV16E2单基因组以及pcDNA3.1(+)/HPV16E2＋pcDNA3.1(+)/IL-12联合免疫组，每组8只。每只每次注射无菌PBS100L或质粒100g于各组小鼠左后腿股四头肌，免疫4次，1次/2W。于免疫前天剪尾取血以及第8W摘眼球放血，分离血清，-20℃保存；颈椎脱臼处死小鼠，剪取股四头肌，制作组织切片；无菌取脾脏，制备脾细胞悬液。(4)免疫荧光组化法检测HPV16E2蛋白在小鼠肌肉组织中的表达；ELISA间接法测定小鼠血清中HPV16E2IgG抗体水平以及脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-4水平；MTT比色法检测淋巴细胞的增殖，以刺激指数（SI）表示。结果：(1) DNA测序结果显示1098bp HPV16E2基因片段分别正确地连接入pcDNA3.1(+)与pGEX-6P-1载体。构建的pcDNA3.1(+)/HPV16E2真核表达载体能在HeLa细胞表达HPV16E2mRNA；表达的蛋白相应的分子量约为42kDa；且在小鼠肌肉组织中也能有效表达HPV16E2。构建的pGEX-6P-1/HPV16E2原核表达载体在E.coli BL21中表达分子量约68kDa的GST-HPV16E2融合蛋白；Western-blot检测该重组蛋白能与抗HPV16E2抗体结合。(2)小鼠免疫8w后，血清IgG抗体A450值HPV16E2DNA组（0.081±0.005）和联合免疫组（0.084±0.005）显著高于PBS组（0.018±0.005）和pcDNA3.1(+)组（0.019±0.009）（P<0.05）；但在每个时间点，联合免疫组与单基因免疫组比较差异都没有统计学意义（P>0.05）。(3)小鼠脾淋巴细胞培养上清中的IFN-γ和IL-4含量pcDNA3.1(+)/IL-12组（83.98±6.07；36.51±2.68）、pcDNA3.1(+)/HPV16E2组（94.55±5.87；68.40±6.13）和pcDNA3.1(+)/HPV16E2+pcDNA3.1(+)/IL-12组（116.32±5.15；70.08±6.10）明显高于PBS组（42.13±6.07；36.76±2.12）和pcDNA3.1(+)组（41.27±5.47；36.51±2.68），差异具有显著性（P<0.05）；联合免疫组与单基因免疫组的IFN-γ含量差异也具有统计学意义（P<0.05），但两组IL-4含量差异没有统计学意义（P>0.05）。(4)脾淋巴细胞SI值pcDNA3.1(+)/IL-12组（1.25±0.12）、pcDNA3.1(+)/HPV16E2组（1.43±0.08）和pcDNA3.1(+)/HPV16E2+pcDNA3.1(+)/IL-12组（2.01±0.07）明显高于PBS组（1.19±0.07）或pcDNA3.1(+)组（1.16±0.16）（P<0.05）；且联合免疫组高于单基因免疫组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：（1）构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16E2能在HeLa细胞和小鼠，肌肉组织中表达HPV16E2蛋白。（2）构建的原核表达载体pGEX-6P-1/HPV16E2能在E.coli BL21表达GST融合蛋白，并具有良好的抗原性。（3） pcDNA3.1(+)/HPV16E2单基因疫苗组和联合基因疫苗组能刺激小鼠产生较多的特异性抗体和IFN-γ，且其脾淋巴细胞SI明显升高。（4）联合基因疫苗组的脾淋巴细胞SI和产生的IFN-γ较单基因疫苗组更高。