氟甲喹免疫层析试纸条的研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:yoyoyu2008
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本论文选择氟甲喹(FLU)作为目标物,制备能够特异性识别氟甲喹的多克隆抗体,建立氟甲喹的胶体金标记免疫层析分析方法和胶体碳标记免疫层析分析方法;并应用于动物源性食品中氟甲喹残留的可视化检测。在此基础上建立胶体金和胶体碳标记的多残留免疫层析分析方法。采用碳二亚胺法和混合酸酐法分别制备免疫原FLU-BSA和FLU-KLH,免疫新西兰大白兔获得抗氟甲喹多克隆抗体。经抗血清效价及抑制率的比较,最终选择FLU-BSA为免疫原免疫的1号兔产生的抗血清进行后续实验,抗血清效价为1:256000。优化条件,建立间接竞争ELISA方法,灵敏度IC50值为10.9±2.62μg/L;检出限IC15值为0.79 ±0.33 μg/L。建立氟甲喹胶体金标记免疫层析分析方法。胶体金颗粒的粒径为20 nm;金标抗体连接的最佳pH值为8.5、最适抗体量为20 μg/mL;捕获抗体的包被浓度为0.5 mg/mL,二抗1:200倍稀释,选择MillliporeHF135s硝酸纤维膜作为固相载体,金标抗体1:10稀释喷涂到金标垫上;在最优条件下组装试纸条,将金标抗体铺在结合释放垫上的组装方式其方法检测限为20 μg/L;选择鸡肉、牛肉、猪肉、鱼肉、虾肉、猪肝和牛奶7种实际样品进行添加实验,样品检测限为50μg/L。建立氟甲喹胶体碳标记免疫层析分析方法。将碳标抗体铺在结合释放垫上不可行;将碳标抗体在溶液状态下与标准品混合上样方法,在最优条件下组装试纸条,检测限为20 μg/L。选择鸡肉、牛肉、猪肉、、鱼肉、虾肉、猪肝和牛奶7种实际样品进行添加回收实验,样品检测限为50 μg/L。以胶体金标记沙丁胺醇抗体,胶体碳标记氟甲喹抗体,建立同时检测沙丁胺醇和氟甲喹的多残留免疫层析分析方法。优化条件,检测结果清晰直观,红色条带代表沙丁胺醇,检测限为2μg/L,黑色条带代表氟甲喹,检测限为20μg/L。
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