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目的:老年性聋是常见的老年性疾病,也是老年人群中最常见的听力障碍之一,但其发病机制目前尚未完全明了。近年来的研究表明,老年人的听力损害是由于末梢器官和脑干的变化同时起作用的。这两种变化都涉及到神经递质的变化,神经递质在听觉传导中发挥着重要作用,听觉系统中兴奋性递质和抑制性递质的相互平衡可以保证听觉信号的正确传入,递质一旦发生改变,必然会影响听觉信号的传入。γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)是哺乳动物中枢神经系统中一种重要的抑制性神经递质。在听觉系统中,GABA主要是通过与其相应的受体结合发挥神经抑制作用,抑制内源性和外源性噪音,从而提高听力和言语辨别率。GABA由谷氨酸经α-脱羧而形成,而谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)是GABA合成的限速酶,中枢神经系统中的GAD有两种存在形式,即GAD65和GAD67。研究表明,听性脑干核团中含有GABA和GAD免疫反应阳性神经元和神经纤维。生理状态下机体可合成一定量的GABA,用于维持神经冲动的正常传导;然而,在病理情况下,许多因素可以影响GAD的生成和活性,进而影响GABA的合成,造成神经冲动传导障碍。结合老年人言语辨别率降低,对声刺激的抑制作用减弱,在嘈杂环境中听力下降的现象,推论听性脑干核团中GABA的变化在老年性聋的发病机制中可能起一定作用。但目前人们对老年性聋的研究主要集中在耳蜗,对听觉中枢的研究甚少,老年性聋时听性脑干核团中GAD是否有变化,研究更少。 为了进一步探讨听性脑干核团及GABA在老年性聋发病机制中的作用,本课题采用甲苯胺蓝染色和免疫组织化学技术观察D-半乳糖衰老大鼠听性脑干核团及其GAD65和GAD67的变化,并分析其原因,为临床预防和治疗老年性聋提供理论依据。 材料与方法:1.以大鼠为研究对象,将60只成年健康、耳廓反射灵敏的Wistar郑州大学2003年硕上毕业论文老年大鼠听性脑+核团及其谷氨酸脱梭酶的变化大鼠(河南省实验动物中心提供)随机分为两组:实验组和对照组,每组30只。实验组每天腹腔注射D一半乳糖50mg/kg/d,连续6周,对照组每天腹腔注射同等量的生理盐水,连续6周。2.各组动物均于用药前和用药后测试听性脑干反应(auditorybrainstem response,ABR)闭值,I、111、V波潜伏期及I一111、111一V、工一V波间期。3.各组动物于用药前和用药后分别采用黄嗓吟氧化酶法和硫代巴比妥酸比色法测试血清超氧化物歧化酶(Super.oxide dismutase,SOD)的活力和丙二醛(MDA)的浓度。4.动物开胸,经左心室用150一200ml生理盐水快速冲净血液,并用4%多聚甲醛磷酸缓冲液(PH7.4) 5O0ml缓慢灌注。随后开颅取脑置于上述缓冲液中,次日修剪标本,取脑干入同样液体中固定l周,石蜡包埋,连续切片。每只大鼠选特定平面即耳蜗核,上橄榄复合体,外侧丘系核和下丘核处的切片各四套。一套行甲苯胺蓝染色,两套用SABC法进行GAD65和GAD67免疫组织化学染色,另一套做阴性对照。5.用HPIAS一1000电子计算机图像分析系统进行图像分析,测定听性脑干核团GAD65和GAD67阳性反应产物的平均灰度值,按此结果比较GAD含量的多少。6.实验数据经SPSS10.0统计软件进行统计学处理,采用t检验和相关分析,取Q=0 .05为显著性检验水准。 结果:1.对照组用药后ABR反应闭值,工、工11、V波潜伏期及卜11工、Hl布、工一V波间期无明显改变。实验组用药后ABR反应闭值明显提高,工、工工I、V波潜伏期明显延长,I一I工I、111一V、工一V波间期亦明显延长。两组均值有显著性差异。2.对照组用药后血清SOD活力、MDA浓度无明显变化,实验组用药后SOD活力明显下降,MDA浓度明显提高。两组均值有显著性差别(尸<0.01)。3.甲苯胺蓝染色光镜下显示,实验组大鼠脑干各听性核团神经细胞数目明显减少,胶质细胞增生,神经细胞肿胀,胞核和胞浆邹缩,脂褐素沉积,尼氏体减少,胞浆内空泡形成,核膜不规则,毛细血管管腔增多,内皮细胞增生肥大,管壁增厚。4.免疫组织化学结果显示实验组听性脑干各核团GAD65和GAD67阳性反应物的分布区域与对照组相比无明显变化,但棕黄色颗粒明显减轻,阳性细胞和阳性纤维数明显减少。图像分析系统显示实验组的灰度值比对照组大,即GAD65和GAD67免疫反应程度低。经统计学检验差异具有显著性(尸<0.01)。分别对实验组用药后的ABR反应闭与GAD65和GAD67的灰度值进行相关性分析,发现ABR反应闲和两者都呈正相关。 结论:1.老年大鼠不仅有耳蜗病变外,脑干传导通路也有病变。2.老年大鼠听性脑干核团神经元有退行性变。3.老年大鼠听性脑干核团中GAD65和GAD67免疫反应阳郑州人学2003年硕l毕业论文老年人鼠听性脑十核团及其谷氨酸脱梭酶的变化性神经元和神经纤维减少,这可能与老年性聋的发生有关。 在临床上,我们可以应用提高脑内GAD和GABA的药物,降低老年性聋的发病率,提高老年人的听力。这样,本实验为临床上预防和治疗老年性聋提供了理论依据和实验基础。