第一部分巨细胞病毒vMIA蛋白的表达规律 　　目的：观察人巨细胞病毒(HCMV)vMIA蛋白表达的规律性，研究vMIA蛋白的表达与宿主细胞凋亡的关系。 方法：建立人胚肺成纤维细胞(humanembryolungfibroblast，HELF)系，用HCMVADl69株感染人胚肺成纤维细胞，并用蚀斑法测定病毒的滴度。采用间接免疫荧光的方法检测vMIA蛋白在HCMVADl69株感染人胚肺成纤维细胞的不同时间点中的表达。同时用流式细胞术检测细胞凋亡指数。 结果：HCMV感染后4hvMIA蛋白开始表达，但是感染后24h，只有约10％的细胞表达阳性，而感染后48h后就有70％以上的细胞表达vMIA蛋白，以后其表达逐渐减少。HCMV感染48h的细胞凋亡指数显著低于对照组，96h细胞凋亡指数则明显高于对照组。vMIA蛋白的表达时间与巨细胞病毒抑制凋亡的时间一致。 结论：vMIA蛋白参与巨细胞病毒抑制宿主细胞凋亡的作用。 第二部分人巨细胞病毒vMIA蛋白抑制宿主细胞凋亡的机制 目的：构建表达vMIA蛋白的真核表达载体PCDNA3.1-UL37xl，研究其抑制宿主细胞凋亡的作用机制。 方法：利用PCR扩增出vMIA编码蛋白的基因；然后将其插入到真核表达质粒pcDNA3.1，产生真核表达质粒pcDNA3.1/UL37xl，并将该质粒进行酶切鉴定和测序分析。将pcDNA3.1/UL37xl真核表达质粒转染人胚肺成纤维细胞，经G418筛选，免疫荧光鉴定vMIA的表达。用流式细胞术检测TNFα+CHX攻击后细胞凋亡指数，westernblot方法检测Bid蛋白，bcl-2及cytoC的表达变化，免疫组化检测active-caspase3的表达，共聚焦显微镜观察线粒体膜电位的变化。 结果：成功构建vMIA真核表达载体，并通过筛选获得表达vMIA蛋白的HELF/UL37xl细胞。TNFα可以使Bid蛋白剪切激活，线粒体膜电位下降幅度明显增加，细胞色素C释放，激活caspase3从而诱导细胞发生凋亡；而转染PCDNA3.1/UL37xl的HELF细胞可以抑制TNFα+CHX所诱导的细胞凋亡，vMIA蛋白的表达可以稳定线粒体膜电位，阻止细胞色素C的释放及caspase3的激活，但它不能阻止Bid蛋白的剪切激活。vMIA的表达对bcl-2的表达变化无影响。结论：vMIA参与巨细胞病毒抑制细胞凋亡的作用。它作用于凋亡信号途径中Bid的下游，而在细胞色素C的上游。它的这种作用与bcl-2无关。 第三部分金叶败毒颗粒抑制人巨细胞病毒vMIA蛋白的实验研究 目的：通过研究金叶败毒颗粒对人巨细胞病毒vMIA蛋白表达及作用的调节，探讨金叶败毒颗粒体外对HCMV感染的预防、阻断和治疗效应及其机制。 方法：利用MTT比色法进行药物毒性实验。在病毒感染不同阶段(病毒吸附前、吸附时和吸附后)应用金叶败毒颗粒，观察药物对HCMVvMIA蛋白表达水平的影响。用流式细胞术检测药物对TNFα+CHX攻击后细胞凋亡指数的影响。以更昔洛韦为药物对照。 结果：金叶败毒颗粒的最大无毒浓度(TD0)为10mg/ml。金叶败毒颗粒可显著抑制HCMVvMIA蛋白的表达，其作用较更昔洛韦弱。金叶败毒颗粒可以恢复被vMIA抑制的TNFα诱导的凋亡，但更昔洛韦无此功效。 结论：金叶败毒颗粒可显著抑制HCMVvMIA蛋白的表达及其作用，这可能是金叶败毒颗粒抗HCMV效应的主要作用机制之一。