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研究背景：随着围产医学的不断发展，早产儿的存活率不断提高，早产儿的严重并发症-支气管肺发育不良（BPD）也随之增多，已成为影响早产儿存活和远期生存质量的重要问题。目前BPD发病机制未完全阐明，高氧是其高危因素之一。高氧可通过多种途径引起肺损伤，导致肺泡、肺微血管发育不良及间质纤维化，促进BPD发生。成纤维细胞生长因子（FGF）家族是一类多效能的促增殖生长因子，在肺发育、肺损伤修复及肺纤维化等生理及病理过程中发挥重要作用。在高氧或炎症性BPD动物模型中，已证明FGF水平紊乱与BPD发生密切相关。FGF-1、FGF-2是FGF家族中最早发现也是研究最多的亚型，但高氧对细胞FGF-1、FGF-2的直接影响目前尚不明确。作为临床最常用的BPD治疗药物—地塞米松（DEX），是否可保护高氧性细胞损伤?调节FGF-1、FGF-2是否可能是地塞米松保护高氧性细胞损伤的机制之一?本研究拟利用人胚肺成纤维细胞（MRC-5）制作高氧细胞损伤模型，从分子水平上探讨地塞米松治疗BPD的可能机制，为地塞米松治疗BPD提供理论依据。 目的： 1.观察95％ O2诱导MRC-5细胞损伤的最佳时间，制作高氧细胞损伤模型，筛选DEX的最佳工作浓度进行后续实验。 2.观察95% O2对MRC-5细胞FGF-1、FGF-2及miRNA-16的影响，以及DEX的干预效应，探讨DEX干预高氧性细胞损伤的可能机制。 方法： 1.取对数生长期的MRC-5细胞随机分为空气组、高氧组、高氧+DEX组。空气组直接置于普通培养箱（21% O2）中，高氧组置于含95% O2的高氧环境中，高氧+DEX组置于高氧环境前加入不同浓度的DEX（DEX浓度分别为10-4、10-6、10-8、10-9、10-10、10-11、10-12 mol/L），分别于24h、48h、72h用MTT法检测各组细胞的增殖活性。ELISA法检测48h时各组细胞（高氧+DEX组中DEX浓度为10-9 mol/L）培养上清中IL-6蛋白浓度。 2.取对数生长期的MRC-5细胞随机分为空气组、高氧组、高氧+DEX组（DEX浓度为10-9 mol/L）。培养48h，实时荧光定量PCR法检测各组细胞FGF-1、FGF-2及miRNA-16 mRNA的表达水平，Western blot法检测FGF-1、FGF-2蛋白含量。 结果： 1.高氧对MRC-5细胞增殖和IL-6分泌的影响及DEX浓度的筛选 1.1高氧对MRC-5细胞增殖和IL-6分泌的影响 1.1.1高氧对MRC-5细胞增殖活性（OD值）的影响：24h、48h、72h时高氧组OD值分别为0.78±0.02、0.89±0.03、0.76±0.03，空气组OD值分别为0.80±0.04、1.03±0.05、1.12±0.05。同一时间点不同组相比，高氧组OD值均低于空气组，24h时差异无统计学意义（t=1.375，P=0.206），48h、72h差异有统计学意义（t=3.827，P=0.005；t=5.886，P=0.000）；高氧组不同时间点比较，48h时OD值最高。因此选择48h作为后续实验的时间点。 1.1.2高氧对MRC-5细胞IL-6分泌的影响：培养48h，IL-6蛋白水平高氧组为3483±433 pg/ml，空气组为2364±306 pg/ml，两组比较差异有统计学意义。 1.2 DEX对高氧暴露下MRC-5细胞增殖及IL-6分泌的影响 1.2.1不同浓度DEX对高氧暴露下MRC-5细胞增殖活性（OD值）的影响：与高氧组相比，各时间点高氧+DEX组OD值均增高，24h、48h、72h差异均有统计学意义。各时间点随DEX浓度降低OD值增高，10-9 mol/L时出现峰值，之后随着DEX浓度降低OD值下降。因此选择10-9 mol/L作为DEX的最佳工作浓度进行后续实验。 1.2.210-9mol/L DEX对高氧暴露下MRC-5细胞IL-6分泌的影响：IL-6蛋白水平高氧+DEX组为2364±388 pg/ml，高氧组为3483±433 pg/ml，两组比较差异有统计学意义。 2. DEX对MRC-5细胞FGF-1、FGF-2及miRNA-16的影响 2.1 DEX对MRC-5细胞FGF-1、FGF-2及miRNA-16 mRNA表达的影响：FGF-1 mRNA水平高氧组（0.22±0.15）较空气组（1.04±0.15）下调，高氧+DEX组（0.61±0.20）较高氧组上调，差异有统计学意义；FGF-2 mRNA水平高氧组（2.09±0.24）较空气组（1.18±0.26）上调，高氧+DEX组（1.64±0.30）较高氧组下调，差异有统计学意义；miRNA-16 mRNA水平高氧组（2.49±0.52）较空气组（1.08±0.18）上调，高氧+DEX组(1.43±0.25)较高氧组下调，差异有统计学意义。 2.2 DEX对MRC-5细胞FGF-1、FGF-2蛋白合成的影响：FGF-1蛋白水平高氧组(0.2±0.03)低于空气组(0.6±0.04)，高氧+DEX组(0.5±0.04)高于高氧组，差异有统计学意义；FGF-2蛋白水平高氧组(1.2±0.07)高于空气组(0.4±0.03)，高氧+DEX组(0.7±0.07)低于高氧组，差异有统计学意义。 结论： 1.95% O2可抑制MRC-5细胞增殖、促进IL-6分泌，在一定范围内随时间延长增殖抑制效应增强；95% O2刺激48h可制造较好的高氧细胞损伤模型；DEX可部分逆转高氧所致的细胞增殖受抑及IL-6分泌，10-9 mol/L为最佳浓度； 2.95% O2可诱导MRC-5细胞FGF-1 mRNA及其蛋白水平下降、FGF-2 mRNA及其蛋白水平上升、miRNA-16 mRNA水平上调，DEX可部分逆转上述作用，由此推测，上调FGF-1 mRNA及其蛋白水平，下调FGF-2 mRNA及其蛋白水平和下调miRNA-16 mRNA水平可能是DEX干预高氧性损伤的机制。