边鸡源乳酸菌的分离鉴定和筛选及其作为抗生素替代物饲喂蛋鸡的初步研究

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由于抗生素类产品在养殖业的广泛使用和滥用引起的耐药菌、药物残留等的不良后果,使人们不得不寻找新的方法和产品替代抗生素的使用。乳酸菌作为目前研究最多和应用最广的益生菌,在养殖业中成为理想的抗生素替代品促进畜牧业更好、更快的发展。本研究拟从健康边鸡肠道中分离鉴定并筛选出生长性能良好、耐受性强和抑制致病菌生长能力较强的优势乳酸菌,并对其进行相关安全性试验,最后与抗生素共同用于蛋鸡养殖中,研究并对比二者对蛋鸡体重、免疫功能、抗氧化能力和抗体水平的影响,为乳酸菌作为抗生素替代物在家禽生产中的应用提供理论依据,为将其开发为益生菌饲料添加剂提供参考。试验一边鸡源乳酸菌的分离鉴定及筛选:从健康边鸡肠道中分离鉴定并筛选出生长特性良好、耐受性强和抑制致病菌性能优良的乳酸菌。以健康边鸡十二指肠、空肠、回肠和盲肠中的内容物为样品,利用MRS选择培养基分离乳酸菌并统计各肠道乳酸菌数量,对分离到的菌株纯化后通过细菌形态学鉴定、菌株生化鉴定和16S rDNA序列分析进行鉴定,各肠道乳酸菌数量统计表明,乳酸菌在鸡肠道中主要分布于盲肠,空肠与回肠较少,十二指肠最少;通过形态学鉴定、菌株生化鉴定和16S rDNA序列分析成功分离鉴定到5株乳酸菌分别为菌株I(卷曲乳杆菌)、L(约氏乳杆菌)、G(唾液乳杆菌)、Y(植物乳杆菌)和F(嗜酸乳杆菌)。通过生长曲线的测定、耐酸试验、耐胆盐试验、胃液耐受性试验、肠液耐受性试验以及抑菌试验(致病性的大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌)进行优势乳酸菌株的筛选。生长曲线表明,G、Y和F菌株比I和L菌株更早进入对数生长期,生长速度较快;耐酸试验表明,G、Y和F菌株较I和L菌株受较低p H的影响较小;耐胆盐试验表明,G、Y和F菌株较I和L菌株受高浓度胆盐影响较小;胃液耐受性试验表明,G、Y和F菌株耐受人工胃液能力较强;肠液耐受性试验表明,G、Y和F菌株耐受人工肠液能力较强;抑菌试验表明,G、Y和F菌株的抑菌圈直径大于I和L菌株。经过上述步骤筛选后得到3株优势乳酸菌G、Y和F。试验二3株优势乳酸菌的安全性评价:对筛选出的3株优势菌株进行相关的安全性试验,确保其安全性以便在实际生产中投入使用。本研究安全性试验主要包括溶血试验、抗生素敏感性试验、菌株间拮抗试验和小鼠试验。溶血试验结果表明,3株分离菌株均不会引起溶血,对红细胞没有影响;抗生素敏感性试验结果表明,3株分离菌株对大部分抗生素敏感;菌株间拮抗试验结果表明,3株分离菌株互相均无拮抗现象,共同生长效果良好。3株优势菌株的混合菌液小鼠灌胃试验结果表明,小鼠行为表现正常,体重均有所增加,试验组与对照组组间无显著差异(P>0.05);试验组和对照组的血常规指标均处于正常范围,无显著性差异(P>0.05);试验组和对照组的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、血尿素氮和肌酐的生化检查结果均在正常范围内,且无显著性差异(P>0.05);细菌易位检测表明,无细菌易位现象发生;对灌胃后小鼠肝脏和肾脏进行组织切片检查,对照组和实验组的肝脏和肾脏未见异常。本试验结果表明,G、Y和F 3株优势乳酸菌及其组成的混合菌液是安全的,可以在实际的生产中投入使用。试验三边鸡源混合乳酸菌替代抗生素饲喂蛋鸡的初步研究:将3株优势菌株混合后制成混合菌液,添加到蛋鸡日粮中饲喂,并与添加抗生素组比较,研究乳酸菌对蛋鸡体重、免疫功能、抗氧化能力和抗体水平的影响。试验采用单因素完全随机设计,分为对照组、抗生素组、高剂量组、中剂量组和低剂量组。结果表明,试验组的体重均显著高于对照组(P<0.05),中剂量组和抗生素组无显著性差异(P>0.05);试验组的血清免疫球蛋白Ig A、Ig G和Ig M含量均显著高于对照组(P<0.05),中剂量组和抗生素组的Ig A、Ig G和Ig M含量不存在显著性差异(P>0.05);试验组的脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数均显著高于对照组(P<0.05),中剂量组和抗生素组的脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数不存在显著性差异(P>0.05);对照组的丙二醛(MDA)显著高于抗生素组、中剂量组和高剂量组(P<0.05),抗生素组、中剂量组和高剂量组的超氧化物歧化酶(SOD)均显著高于低剂量组和对照组(P<0.05),试验组的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总抗氧化能力(T-AOC)均显著高于对照组(P<0.05);试验组和对照组的抗体水平(新城疫抗体效价)均有不同程度的上升,且试验组均显著高于对照组(P<0.05),中剂量组和抗生素组无显著差异(P>0.05)。本研究表明混合乳酸菌对蛋鸡的体重、免疫功能、抗氧化能力和抗体水平具有促进作用,与抗生素具有相似的效果,且乳酸菌混合菌液的最佳添加剂量为10~9CFU/m L(中剂量组)。
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