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第一部分 PCOS患者颗粒细胞中IGF1R/PI3K信号通路基因的表达背景:多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种育龄期妇女相对常见的内分泌代谢紊乱性疾病,其主要临床特征包括以下三点:高雄激素血症、卵巢多囊样改变和持续性无排卵。大量的证据表明磷酯酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)信号通路在PCOS发病机制中发挥重要的作用,但对胰岛素样生长 1 受体(insulin like growth factor 1 receptor,IGF 1R)/PI3K信号通路在PCOS患者中的表达及可能的作用,并不清楚。因此,本研究的目的是通过检测IGF1R/PI3K信号通路的核心基因在PCOS患者卵巢颗粒细胞中的表达,推测其在PCOS发生中的作用。方法:采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白电泳检测60例PCOS患者(PCOS组)和60例对照患者(对照组)颗粒细胞中IGF1R、胰岛素受体底物 1(insulin receptor substrates 1,IRS1)、胰岛素受体底物2(insulin receptor substrates 1,IRS2)、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase andtensin homologue,PTEN)和转录因子叉头框蛋白 01(forkead box protein 01,FOXO1)的表达,并分析其临床意义。结果:PCOS组的体质量指数(body mass index,BMI)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、抗苗勒氏激素(anti-Mullerian hormone,AMH)、睾酮(testosterone,T)、黄体生成素(luteotropic hormone,LH)、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)、卵巢基础卵泡数(antral follicle count,AFC)明显高于对照组,而卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)低于对照组(P<0.05)。此外,在mRNA和蛋白水平上,PCOS患者颗粒细胞中IGF1R、IRS1、IRS2的表达显著升高,而PTEN和FOXO1的表达明显降低(P<0.05)。结论:我们的研究结果表明,与对照组相比,PCOS患者颗粒细胞中IGF1R/PI3K信号通路过度激活,IGF1R、IRS1、IRS2显著升高,而PTEN和FOXO1表达水平明显降低。因此,我们的研究可能从分子水平上为PCOS的发病机制提供了新的证据。第二部分 MicroRNA-183通过靶向调节FOXO1的表达抑制颗粒细胞的增殖背景:微小RNAs(MicroRNAs,miRNAs)在多种生物学和病理学过程中发挥重要的作用,与PCOS的发病密切相关。本研究旨在探讨miR-183是否参与PCOS患者颗粒细胞的异常增殖及其机制。方法:采用qRT-PCR检测115例患者(55例PCOS vs 60例对照组)颗粒细胞中miR-183的表达。通过转染改变颗粒细胞中miR-183和靶基因表达水平,利用CCK-8(cell countingkit-8)检测细胞的增殖能力。MiR-183的靶基因首先通过Targetscan生物信息学软件预测,然后采用qRT-PCR、蛋白电泳、双荧光素酶报告等方法进行验证。胰岛素处理颗粒细胞进一步验证miR-183与靶基因的关系。结果:PCOS患者颗粒细胞中miR-183表达明显升高,且过表达miR-183抑制颗粒细胞的增殖。FOXO1是miR-183的直接调控的靶基因,下调FOXO1可显著降低颗粒细胞的增殖。此外,胰岛素增加了 miR-183的表达,而FOXO1在mRNA和蛋白水平上均受到抑制。结论:我们的研究结果显示,在PCOS中显著升高的miR-183通过靶向FOXO1抑制颗粒细胞的增殖。胰岛素可上调miR-183的表达,明显降低FOXOl的水平。本研究为miR-183在颗粒细胞异常增殖中的作用提供了新的证据,可能在PCOS的发病机制中发挥重要作用。第三部分 MicroRNA-200c通过靶向调节PTEN的表达抑制颗粒细胞的增殖背景:PCOS是一种以高雄激素血症、多囊卵巢和排卵功能障碍为特征的内分泌代谢紊乱性疾病。已有大量研究报道,miRNAs的异常表达在PCOS发病机制中发挥重要作用,但miR-200c在PCOS患者颗粒细胞中的表达和生物学功能仍不清楚。方法:采用qRT-PCR检测90例PCOS患者(PCOS组)和70例对照患者(对照组)卵巢颗粒细胞中miR-200c的表达。利用TargetScan生物信息学软件预测miR-200c的靶基因,并通过qRT-PCR、蛋白电泳、双荧光素酶报告等方法进一步验证。在颗粒细胞中过表达miR-200c、下调靶基因,以及胰岛素处理后进行CCK-8检测。结果:与对照组相比,PCOS患者颗粒细胞中miR-200c的表达明显增加,且miR-200c的过表达抑制颗粒细胞的增殖。PTEN是miR-200c的靶基因,胰岛素通过降低PTEN的表达,抑制颗粒细胞的增殖。结论:我们的研究结果表明,miR-200c通过负调控PTEN的表达抑制颗粒细胞的增殖,为PCOS患者颗粒细胞的异常增殖提供了新的证据。