长柄臭黄荆果胶的制备与抗炎研究

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背景:长柄臭黄荆(Premna puberula Pamp.)隶属于唇形科(Lamiaceae)豆腐柴属(Premna Linn.),富含多种营养成分,包括蛋白质和果胶,还含有黄酮类等多种药用成分。民间通常采收植物的鲜叶用于制作长柄臭黄荆果胶即“神仙豆腐”,这是一种清香味浓且色泽淡雅的绿色纯天然食品。其色泽碧绿,有清热解毒和退火的功效,具有较好的保健功能和营养价值。现有研究证明,形成“豆腐”的关键因素是叶中含有丰富的果胶。据《全国中草药汇编》记载,长柄臭黄荆可清湿热,调经解毒。主治风湿性关节炎,月经不调,水肿;外用于无名肿毒。目前关于同属植物的理化性质及其药理作用研究有文献报道,而长柄臭黄荆鲜有研究。目的:制备武当特色食品长柄臭黄荆果胶,并研究其质量控制、制备工艺、药理作用和急性毒性。方法:采集鲜叶,以UPLC-Q-TOF-MS/MS对长柄臭黄荆醇提物进行质谱数据采集,结合文献报道以及天然产物高分辨质谱数据库对样品中化学成分进行分析;以硫酸咔唑法测定干叶中果胶的含量;以水溶性糖和总黄酮为质量控制标志物,水溶性糖和总黄酮含量分别采用苯酚-硫酸法和亚硝酸钠-硝酸铝法。L9(3~4)正交实验法优化长柄臭黄荆果胶(PP)的制备工艺,以方差分析综合得出最佳制备工艺;以角叉菜胶溶液皮下注射ICR小鼠右足构建小鼠足肿胀炎症模型,观察肿胀率;以HE染色观察模型小鼠局部组织炎症反应;以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎性因子的表达;以最大给药量法研究对小鼠的急性毒性实验。结果:长柄臭黄荆中鉴定出53种化合物,其中黄酮类化合物有19种,酚酸类16种,苯乙醇苷类5种,脂肪酸类6种,杂环类化合物7种;干叶中果胶8月平均含量最高,为51.349 mg/g;水溶性糖含量以5月和10月含量较高,分别为262.894 mg/g和254.159 mg/g;总黄酮含量以10月最高,为49.147 mg/g;提示8月产量最高,8-10月季节质量最优。PP中水溶性糖平均含量为13.366 mg/g,总黄酮平均含量为4.970mg/g。最佳制备工艺为料液比1:20,温度90°C,搅拌时间3 min。动物实验结果表明,PP能减轻模型小鼠足跖肿胀,降低血清IL-6、TNF-α和IL-1β水平;且6000mg/kg/24 h的PP剂量对小鼠无毒性作用。结论:长柄臭黄荆主要成分为黄酮类化合物;8-10月可能是长柄臭黄荆叶的最佳采收季节。以正交试验可获得PP的最佳制备工艺;PP具有抗炎作用,可能与富含黄酮类成分有关;PP在6000 mg/kg/24 h的剂量下对小鼠无毒。
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