【摘 要】
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目的:介于帕金森病（PD）目前尚缺乏特异性诊断方法,本研究拟基于同位素定量标记相对和绝对定量（i TRAQ）技术探索PD患者血清外泌体的蛋白质谱改变,通过与健康人群的信息对比,结合生物信息学方法寻找PD患者相对健康人群的差异表达蛋白及其生物学功能。方法:收集无合并症的帕金森患者和健康人的血清样本,差异离心分离血清样本中的外泌体,通过透射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析鉴定外泌体,采用蛋白质免疫印迹方法
【基金项目】
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山西省留学回国人员科技活动择优资助项目“帕金森病相关外泌体蛋白组学研究（编号:2019-91）”
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目的:介于帕金森病（PD）目前尚缺乏特异性诊断方法,本研究拟基于同位素定量标记相对和绝对定量（i TRAQ）技术探索PD患者血清外泌体的蛋白质谱改变,通过与健康人群的信息对比,结合生物信息学方法寻找PD患者相对健康人群的差异表达蛋白及其生物学功能。方法:收集无合并症的帕金森患者和健康人的血清样本,差异离心分离血清样本中的外泌体,通过透射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析鉴定外泌体,采用蛋白质免疫印迹方法检测分化蛋白9（CD9）和肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）等外泌体表面标志物,使用i TRAQ标记联合LC-MS/MS技术鉴定血清外泌体中的差异表达蛋白,并对差异蛋白进行GO和KEGG分析探索其潜在生物学功能,利用STRING数据库建立差异蛋白互作网络,进一步挖掘相关蛋白。结果:从PD患者和健康人群中成功分离出了血清外泌体,与对照组相比,PD组共检测到41个差异表达蛋白,其中24个蛋白上调,17个蛋白下调。KEGG通路富集分析表明,这些差异蛋白主要富集于疾病或与造血功能相关的通路,GO-生物学过程分析表明,大部分差异蛋白参与了免疫调节、囊泡转运、应激反应和信号转导。此外,蛋白互作网络揭示了一些可能与PD病理机制相关的关键蛋白。免疫印迹和酶联免疫吸附实验进一步证实,帕金森患者的血清外泌体中SERPINA3和HPX高表达,PLTP低表达。结论:研究发现PD患者和健康人群外周血清外泌体蛋白表达存在差异,生物信息学分析提示差异蛋白与免疫和信号转导相关,特定差异表达的蛋白有望作为PD诊断的标志物进一步探索。
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