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目的:邻苯二甲酸二异壬酯（Diisononyl phthalate,DINP）是一种邻苯二甲酸酯类化合物,广泛应用于工业生产中。现有研究证明暴露于一定剂量的DINP对大脑、肝脏、肾脏、肠道、卵巢以及雄性子代发育均有不良影响。DINP可导致男性生殖系统损伤,然而其具体分子机理尚不清楚。本课题拟通过研究DINP对小鼠睾丸间质细胞（TM3）的毒性作用及其可能发生机制,为评估DINP对雄性生殖的毒性作用及其分子机制提供新的实验依据和理论基础。方法:1.用CCK-8法检测DINP对小鼠睾丸间质细胞活性的影响;2.用Western blot和透射电子显微镜法检测DINP对小鼠睾丸间质细胞自噬的影响;3.用q PCR和Western blot法检测DINP对小鼠睾丸间质细胞STX17基因表达的影响;4.构建STX17过表达载体并设计相应si RNA,用Western blot和透射电子显微镜法检测STX17对小鼠睾丸间质细胞自噬的影响;5.用q PCR和Western blot法检测STX17在DINP诱导小鼠睾丸间质细胞自噬中的作用,再通过透射电子显微镜观察细胞自噬情况;6.用q PCR和Western blot法检测DINP对小鼠睾丸间质细胞YY1基因表达的影响;7.用q PCR和Western blot法检测YY1对小鼠睾丸间质细胞中STX17基因表达的影响;8.构建荧光素酶报告基因并进行定点突变,用双荧光素酶报告实验和染色质免疫共沉淀实验（Ch IP）检测YY1是否可与STX17基因启动子区域结合并促进其基因转录;9.构建YY1过表达载体并设计si RNA,用q PCR、Western blot和透射电子显微镜法检测YY1对小鼠睾丸间质细胞中STX17的表达及自噬的影响;10.用q PCR和Western blot法检测YY1在DINP诱导小鼠睾丸间质细胞自噬中的作用,再通过透射电子显微镜观察细胞自噬情况,以明确DINP是否通过YY1/STX17信号通路诱导小鼠睾丸间质细胞自噬。结果:1.CCK-8法检测结果显示,DINP呈浓度依赖式抑制小鼠睾丸间质细胞活性（P＜0.05）。2.Western blot结果发现,DINP可使小鼠睾丸间质细胞内自噬相关蛋白Beclin 1、Atg 5和LC3-II的表达量显著升高,LC3-II/LC3-I的比例也显著升高（P＜0.05）;同时,透射电子显微镜结果显示,与对照组相比,400μM DINP处理组中的细胞自噬泡数量显著增加。3.q PCR和Western blot结果发现,DINP可增加小鼠睾丸间质细胞内STX17m RNA和蛋白质表达含量（P＜0.05）;4.将构建的STX17过表达载体转染至小鼠睾丸间质细胞后,Western blot结果发现,细胞中自噬相关蛋白Beclin 1、Atg 5和LC3-II的表达量以及LC3-II/LC3-I的比例均显著升高（P＜0.05）,透射电子显微镜观察到STX17过表达组中的细胞内自噬泡也明显增多;而敲减小鼠睾丸间质细胞中STX17的表达后,自噬蛋白表达则降低。表明STX17可诱导小鼠睾丸间质细胞自噬的发生。5.与DINP处理组相比,si-STX17与DINP联合处理组中的自噬相关蛋白Beclin 1、Atg 5和LC3-II的表达量以及LC3-II/LC3-I的比例也有所降低,同时,细胞中自噬泡数量也明显减少,以上结果进一步明确了,STX17蛋白参与了DINP诱导的小鼠睾丸间质细胞自噬。6.通过对STX17基因启动子区域进行预测分析,发现其启动子区域存在转录因子YY1的4个假定结合位点,q PCR和Western blot结果显示,DINP可上调小鼠睾丸间质细胞内YY1的m RNA和蛋白质表达水平（P＜0.05）。7.构建YY1过表达载体并将其转染至小鼠睾丸间质细胞后,q PCR和Western blot结果显示,YY1过表达可上调小鼠睾丸间质细胞中STX17的m RNA和蛋白水平;而敲减YY1可降低小鼠睾丸间质细胞中STX17的蛋白含量。8.双荧光素酶报告实验结果显示,YY1过表达可显著升高STX17启动子全长（p GL4.2-stx17-prom）的荧光素酶活性（P＜0.05）,随后发现YY1过表达主要促进RE1结合位点的荧光素酶活性,而RE1突变后,YY1过表达对其荧光素酶活性无显著影响（P＞0.05）;染色质免疫共沉淀结果显示,YY1主要与STX17基因启动子区域的RE1位点结合,以上结果表明YY1可通过与STX17基因启动子区域结合并促进其基因转录。9.q PCR和Western blot结果发现,YY1过表达可增加小鼠睾丸间质细胞中自噬相关蛋白Beclin 1、Atg 5和LC3-II的表达量以及LC3-II/LC3-I的比例（P＜0.05）,透射电子显微镜观察到细胞内自噬泡数量也明显增多;而敲减细胞中STX17的表达后,自噬相关蛋白表达量则下降。表明YY1可诱导小鼠睾丸间质细胞自噬。10.与DINP单独处理组相比,si YY1与DINP联合处理组中的自噬相关蛋白Beclin 1、Atg 5和LC3-II的表达量以及LC3-II/LC3-I的比例有所降低（P＜0.05）,细胞中自噬泡数量也明显减少。以上结果进一步证明,DINP可通过YY1/STX17信号通路诱导的小鼠睾丸间质细胞自噬。结论:1.DINP可诱导小鼠睾丸间质细胞产生自噬并促进STX17的表达;2.STX17可促进小鼠睾丸间质细胞自噬,并参与了DINP诱导的小鼠睾丸间质细胞自噬;3.DINP可促进小鼠睾丸间质细胞中YY1的表达;4.YY1可通过与STX17基因启动子区域结合并促进其转录;5.YY1过表达可促进小鼠睾丸间质细胞自噬并参与了DINP诱导的小鼠睾丸间质细胞自噬及STX17的表达。表明:DINP通过YY1/STX17途径诱导小鼠睾丸间质细胞自噬。