论文部分内容阅读
目的:（1）观察向家兔NA内微量注射P2X受体内源激动剂ATP,P2X受体拮抗剂PPADS（pyridoxal-5’-phosphate-6’-azophenyl-2’,4’-disulphonic acid）对常氧呼吸和低氧呼吸反应的影响,探讨P2X受体在低氧呼吸反应中的作用;（2）进一步应用免疫组织化学的方法,观察P2X受体在NA内表达的数量变化,探索P2X受体在介导低氧呼吸中的作用及其可能的机制。方法:1.电生理学实验:实验在麻醉、肌松、人工通气的成年家兔上进行。常氧通气为医用空气（20%O2-80%N2）,低氧通气为10%O2-90%N2混合气体。以膈神经放电为呼吸观察指标。实验在56只健康成年家兔上进行,通过解剖定位和引导呼吸神经元放电定位NA。微量注射:向NA内微量注射P2X受体内源激动剂ATP,观察注射前后,常氧和低氧通气对膈神经放电以及动脉血pH值的变化;为了检验向NA内注射ATP引起的呼吸效应是否呈现剂量依赖性,向NA内注射4个剂量的ATP（0.1,0.3,0.5,0.7μl）。每次注射之间至少间隔1小时;向NA内微量注射广谱P2X受体拮抗剂PPADS（吡多醛衍生物）,5分钟后在同一位点注射ATP 0.3μl,观察注射前后常氧和低氧通气对膈神经放电的影响。2.免疫组织化学实验:健康成年家兔32只,随机分为4组:A组（n=8）:注射生理盐水;B组（n=8）:注射ATP;C组（n=8）:注射PPADS;D组（n=8）:不注射。A、B、C组动物急性缺氧后快速处死,D组动物直接处死,迅速取出脑干,以10%福尔马林PBS溶液浸泡固定脑组织。石蜡包埋后进行切片。采用免疫组织化学方法SP法观察P2X受体在NA内的表达情况。结果:1.电生理学实验结果:低氧通气开始后,动物膈神经放电幅度和呼吸频率迅速增加,在低氧通气2分钟左右时达到高峰,随后有逐渐衰减的趋势,但在整个5分钟的低氧通气过程中,始终高于常氧通气状态下的放电幅度和呼吸频率;向NA内微量注射ATP对常氧通气下的膈神经放电没有明显影响,但能显著性增强膈神经放电对低氧呼吸的反应以及降低动脉血pH值;4种剂量的ATP在NA内引起的呼吸兴奋效应呈现显著的剂量依赖性,微量注射大剂量ATP对膈神经放电的兴奋效应明显大于小剂量ATP;向NA内微量注射PPADS对常氧通气下的膈神经放电没有明显影响但削弱ATP引起的低氧呼吸反应。2.免疫组织化学实验:（1）各组均在NA处观察到P2X受体的表达。（2）统计分析显示低氧通气组动物P2X受体数目比常氧组显著增多,即A、B、C三组P2X受体数目比D组表达明显增加（P＜0.01）。结论:在常氧通气即生理状态下,脑干NA的P2X受体在呼吸调控中无明显作用,但均参与了低氧呼吸反应的形成,增强低氧呼吸反应,而P2X受体阻断剂PPADS削弱ATP引起的低氧呼吸反应效应。在免疫组织化学实验中发现,P2X受体在家兔NA中有表达,且在低氧通气后表达显著增强。意义:P2X受体在低氧通气后的家兔延髓NA区的明显表达,为ATP对呼吸节律的调节提供了功能结合位点,为进一步深入研究在通气反应中,机体感受Po2、Pco2和氢离子浓度变化后,如何将信息传入呼吸中枢提供了一条新途径。