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作为传染性最强的家畜传染病之一,口蹄疫一旦爆发将给畜牧业乃至国民经济造成巨大经济损失甚至影响国际贸易。接种安全、经济、有效的疫苗是预防口蹄疫至关重要的环节。传统的转瓶生产工艺往往存在操作复杂、生产规模放大困难、疫苗产率较低等问题。此外,血清的添加也将导致疫苗成本的上升、生产过程中安全隐患的增加及疫苗质量难以控制等困境。因此,开发适于BHK细胞悬浮培养的无血清培养基,驯化获得适于无血清悬浮培养的BHK细胞,并建立基于BHK细胞无血清悬浮培养的病毒生产工艺势在必行。首先,利用DOE实验设计方法中的Mixture design和Response surface design实验法,成功开发了一种适于BHK细胞悬浮生长的无血清培养基,能支持细胞生长的最大活细胞密度达到(8.66±0.07)×106 cells/ml,平均比生长速率为(0.85±0.04)d-1。其次,利用优化后的无血清培养基进行BHK贴壁细胞的悬浮适应,并考察驯化成功的BHK悬浮细胞的形态、生长代谢规律及产毒能力。结果发现,利用无血清培养基PM仅需15天即可驯化获得悬浮生长的BHK细胞。驯化成功的BHK悬浮细胞连续传代时平均比生长速率高达0.90 d-1,且批培养中获得的最大活细胞密度较低血清商业培养基提高了24.79%,稳定期延长了48 h。最后,初步探索了初始接种密度和离心换液接毒对病毒在细胞中扩增的影响。通过采用实验确定的最优初始接种密度0.5×106 cells/ml和离心换液接毒,无血清培养基PM和低血清商业培养基中病毒的TCID50均在接毒后16 h达到最大,分别为7.01gTCIDso/0.1 ml和7.121gTCIDso/0.1 ml。由此可见,两种培养基在用于病毒扩增时具有相类似的水平,初步证实了无血清培养基PM可用于口蹄疫病毒的生产。通过本文的工作,开发了适用于BHK悬浮细胞生产口蹄疫疫苗的无血清培养基,驯化获得了可无血清悬浮培养的BHK细胞,初步探索了建立基于BHK悬浮细胞的无血清全悬浮口蹄疫疫苗生产工艺的可行性,为工业规模批量生产口蹄疫疫苗提供了借鉴和数据支持。