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高迁移率核小体结合蛋白Nhp6(high-mobility group nucleosome-binding protein)是一类普遍存在于真核生物中的小分子蛋白。在酵母菌中Nhp6分为两个相似的同源蛋白Nhp6A和Nhp6B,它们非特异性的结合在DNA弯曲处,在促进RNA聚合酶III转录,促进RNA聚合酶II形成转录起始复合物和在促进染色质修饰复合物的形成方面具有重要作用。转录延伸因子ELF1(elongation factor 1)是一类进化保守、结构相似的DNA结合蛋白,与转录延伸和染色体结构的形成有关。Nhp6和ELF1都在转录过程和染色体的修饰方面发挥作用,本课题组在前期研究中通过GST pull-down技术发现在酵母中ELF1与Nhp6有相关性,但没有其他研究报道过这两类蛋白的作用关系,因此并不清楚这两类蛋白之间是否存在一定的调控作用。为了解Nhp6A和Nhp6B是否对酵母Y258的正常生长产生影响,本研究通过长侧翼同源区PCR(LFH-PCR)介导的基因中断法制备了突变体nhp6a(-)和nhp6b(-),并发现当NHP6A和NHP6B中断盒的上下游同源区序列长度在200bp~300bp范围内时,敲除效率最高。本研究基于酵母诱导表达技术的基础上分别构建了pEGH-NHP6A和pEGH-NHP6B表达载体,制备了过表达酵母Y258(pEGH)、nhp6a(+)和nhp6b(+)。本研究在突变体nhp6a(-)和nhp6b(-)的基础上又制备了补救型酵母nhp6a(r)和nhp6b(r)。最后通过滴板实验和测定细胞生长曲线观察上述不同酵母在正常条件下的生长状态来检测Nhp6A和Nhp6B对酵母正常生长的影响。检测结果发现突变体酵母nhp6a(-)和nhp6b(-)均能存活,但nhp6a(-)比野生型酵母生长更缓慢,而补救型酵母nhp6a(r)又恢复正常生长,nhp6b(-)和nhp6b(r)与野生型酵母相比,生长状态没有明显差别,说明Nhp6不是酵母存活所必需的,但比起Nhp6B,Nhp6A对酵母正常生长更重要。检测结果还发现过表达酵母nhp6a(+)和nhp6b(+)相较于空载表达酵母Y258(pEGH)生长更缓慢,说明Nhp6和Nhp6B的过度表达会对酵母的正常生长产生抑制作用。由此说明,Nhp6A和Nhp6B的表达量只有维持在一个特定范围内才能维持酵母的正常生长,不表达或过度表达均能抑制酵母的正常生长。为了解在酵母中Nhp6对ELF1的调控作用,本研究通过Real-time PCR技术检测了在野生型酵母Y258、突变体酵母nhp6a(-)和nhp6b(-)、补救型酵母nhp6a(r)和nhp6b(r)以及过表达型酵母nhp6a(+)和nhp6b(+)中ELF1的表达量的变化情况。结果显示,与野生型酵母相比,随着Nhp6A表达量的增多,ELF1的表达量呈现一个上升的趋势,说明在酵母中,Nhp6A对ELF1起到一个正调控的作用,而Nhp6B表达量的多少对ELF1没有明显的影响,说明Nhp6B对ELF1没有调控作用。综上所述,本研究初步探讨了Nhp6A和Nhp6B对酵母正常生长产生的影响,以及在酵母中Nhp6A和Nhp6B对转录延伸因子ELF1的调控作用。Nhp6和ELF1都在转录过程和染色体修饰方面发挥作用,因此本研究可以为进一步研究Nhp6和ELF1相互作用在酵母转录过程和染色体修饰中的调控作用奠定基础.