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目的多囊卵巢综合征（Polycystic ovarian syndrome,PCOS）是临床上最常见的引起生育期女性卵泡发育障碍的疾病。高雄激素血症是PCOS患者最典型的症状。本研究探讨睾酮对于体外培养颗粒细胞增殖，分泌，以及对细胞骨架蛋白的影响。探讨血清中雄激素浓度过高引起卵泡发育障碍的可能原因和机制。为临床研究不孕症患者控制性超促排卵的治疗方案，减少并发症的发生提供理论基础。方法1、体外培养小鼠卵巢颗粒细胞，并分别用HE染色和FSHR免疫荧光染色作细胞鉴定。2、颗粒细胞分别与等量不同浓度的睾酮（空白对照组和实验组：10－8，10－7，10－6，10－5M）作用，作用时间为24h，48h，72h。分别提取培养上清液并收集培养细胞作指标测定。3、MTT检测不同浓度睾酮对颗粒细胞活性的影响。4、酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清液中AMH，VEGF,HIF1ɑ的含量。5、实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中AMHmRNA,VEGFmRNA,HIF1ɑmRNA的表达。6、细胞骨架肌动蛋白（β-actin）的免疫荧光染色，细胞核DAPI染色，并于激光共聚焦显微镜下观察。结果1、MTT检测细胞活性：10－5M组的睾酮能够抑制颗粒细胞生长，10－8－10－6M组的睾酮能够促进颗粒细胞增殖。2、AMH和AMHmRNA的表达:与空白对照组相比，睾酮作用24h，实验组10-7M和10-6M组，AMH含量分别上升了68%(P＝0.02)和1.2倍(P＝0.001)；睾酮作用48h,10-7M和10-6M组AMH含量分别上升了1.2倍(P＝0.001)和1.76倍(P＝0.000).睾酮作用48h后，10-7M和10-6M组AMHmRNA表达量分别上升了58%(P＝0.001)和24%(P＝0.04)。3、VEGF的含量和VEGFmRNA的表达：睾酮作用24h后，10-7M和10-6M组VEGF分别增加了1.5倍(P＝0.03)和1.05倍(P＝0.04)；睾酮作用48h后，10-7M和10-6M组VEGF分别增加了1.88倍(P＝0.009)和1.37倍(P＝0.005).睾酮作用48h后，实验组VEGFmRNA表达量明显增加。与空白对照组相比，10-7M和10-6M组分别增加了74%(P＝0.005)和1.74倍(P＝0.000）.4.HIF1ɑ的含量和HIF1ɑmRNA的表达：与空白对照组相比，睾酮作用24h时，10-7M和10-6M组HIF1ɑ分别增加了2.5倍（P＝0.005）和3.88倍（P＝0.000）.在睾酮作用48h时，10-7M和10-6M组HIF1ɑ分别增加了2.06倍（P＝0.001）和2.37倍（P＝0.000）。睾酮作用48h时后与对照组相比，10-7M和10-6M HIF1ɑmRNA表达尚未发现明显变化（P＝0.09，P=0.07）。4、实验组睾酮（浓度分别为10-7M和10-6M）作用48h后，颗粒细胞骨架肌动蛋白（F-actin）的免疫荧光染色和细胞核DAPI染色，发现骨架肌动蛋白含量和细胞核形态无明显变化。结论1、高浓度睾酮促进AMH的分泌，可能是睾酮间接导致卵泡发育障碍的原因之一。2、睾酮使颗粒细胞培养液中VEGF,HIF1ɑ的分泌水平增加，造成卵泡液局部相对缺氧的微环境，可能间接影响卵泡正常发育。3、睾酮对颗粒细胞骨架蛋白总量和构象无明显影响。