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食源性致病菌作为主要影响因素引起的一系列食物中毒事件;严重的影响了我国的食品安全。沙门氏菌是较为常见的食源性致病细菌之一;广泛存在于未经消毒的蔬菜、水果、牛奶等。沙门氏菌既能造成家畜、家禽的死亡;作为传染源又长期存于禽畜产品中;严重的威胁人类的健康及食品安全。然而;一般常见的检测方法存在操作繁琐、耗时长、需要大型的操作仪器;花费昂贵以及检测的灵敏性低;特异性不稳定等一系列问题。因此;为了改善一般常见的检测方法的不足;建立一种快速、灵敏、便携的沙门氏菌等食源性致病菌的检测方法;对于维护我国食品安全尤为重要。 核酸夹心ELISA对沙门氏菌可视化检测方法的建立。试验以链霉亲和素标记的微孔板为反应平台;根据检测靶标沙门氏菌标准序列设计标记biotin的抓取探针CP和标记FITC的检测探针DP;通过生物素与链霉亲和素的特异性结合;使得抓取探针 CP 固定在微孔板上;抓取探针 CP 将靶标固定到微孔板上;标记FITC的检测探针DP与靶标结合并间接偶联于微孔板上;anti-FITC-HRP与检测探针DP标记的FITC结合;HRP催化底物TMB显色的作用达到定量监测靶标的作用。实验中对反应条件进行优化:确定抓取探针与微孔板的最佳孵育时间; anti-FITC-HRP与标记探针的最佳孵育时间;沙门氏菌靶标核酸检测的灵敏性、特异性。结果是CP与anti-FITC-HRP的最佳孵育时间分别是2 h;检测方法LOD值为 22.91 pmol/L;除靶标外;其他食源性致病菌的核酸均显示阴性。研究结果说明了该实验方法灵敏度较高;特异性良好;该方法可以同时进行多种细菌核酸的检测;整个过程在6h内完成检测;具有良好的应用性。 多重HCR结合核酸试纸条对沙门氏菌快速检测方法的建立。以沙门氏菌16S rRNA 为靶标;设计多段支撑序列分别启动 HCR 反应;实现信号放大的作用;与试纸条的结合实现了检测结果的快速、可视化输出。靶标16S rRNA与两段特异性抓取探针及多段携带启动序列的辅助探针;形成靶标16S rRNA结合大量的生物素复合物;通过试纸条进行可视化检测。反应时间可在30 min即可完成;检出限可达 53.65 CFU/mL;该方法有较高的灵敏性及稳定的特异性;相较于传统的沙门氏菌的检测方法有较大的改良;使食源性致病菌便携、非专业化、可视化检测成为可能。