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研究背景:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的自身免疫性疾病。其侵蚀性关节炎可导致严重关节畸形,影响生活质量;严重关节外并发症可危及生命。由于RA早期治疗效果较佳,因此,早期诊断、早期治疗对预后非常关键。白介素-7(Interleukin-7,IL-7)是一种重要的细胞因子,在淋巴细胞的增殖与分化中发挥重要作用。IL-7及白介素-7受体(Interleukin-7 receptor,IL-7R)对单核细胞的作用研究较少,可能促进单核细胞分泌促炎因子,增强单核细胞炎症应答,作用的机制仍不明确。一些研究发现IL-7/IL7R可能对RA患者单核细胞分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)也有一定调控作用,但该结论仍有争议。研究目的:通过研究正常人外周血单核细胞中IL-7/IL7R及其他炎症相关细胞因子的表达情况,明确IL-7/IL7R在单核细胞炎症应答中的作用。以此为基础,研究RA患者单核细胞IL-7/IL7R及其他相关细胞因子的表达量情况,协助RA诊治。研究方法:本课题通过收集正常人外周血标本,通过流式细胞学技术及qRT-PCR分析分离提纯单核细胞中IL-7Rα(CD127)、TNFα、IL-6、IL-10等相关细胞因子表达情况。通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染细胞,沉默CD127基因表达,明确IL-7/IL7R对单核细胞分泌炎症相关因子的调控作用。同时收集RA患者血标本,通过流式细胞分析及qRT-PCR测定单核细胞细胞因子表达情况,探究与正常人的异同。比较抗TNFα单克隆抗体治疗前后表达情况,探究IL-7/IL-7R水平与疾病进程的关联。研究结果:正常人:正常人外周血单核细胞中CD127表达量较低,经LPS刺激后可出现高表达CD127、TNFα的单核细胞,随着培养时间的延长,CD127表达量升高的细胞数逐渐增多,直到6小时后又逐渐降低。经LPS刺激后,单核细胞经典型(CD14++CD16-)、中间型(CD14++CD16+)和非经典型(CD14+CD16++)3个亚群CD127表达水平略有差异,无统计学意义。在CD127正常表达时,经LPS刺激后,CD127、TNFα、IL-6、干扰素调节因子-4(interferon regulatory factor-4,IRF-4)、IL-10水平均有上升;当转染siRNA抑制CD127时,经LPS刺激后,TNFα、IL-6表达水平较阴性对照进一步上升,而IRF-4、IL-10表达水平较前有所下降。RA患者:初诊RA患者单核细胞CD127、TNFα表达量较低,与正常人类似,经LPS刺激后可出现高表达CD127、TNFα的单核细胞。难治性RA患者单核细胞较正常人高表达CD127、TNFα,同时对LPS刺激不敏感。线性回归分析可见难治性RA患者单核细胞CD127与TNFα、IL-6呈正相关。抗TNFα治疗2月后RA患者单核细胞内CD127与TNFα表达水平均显著降低,趋于正常,CD127恢复对LPS应答。结论:在正常人中:1.LPS可促进正常人部分单核细胞高表达IL-7/IL7R、TNFα等炎症相关因子,移除LPS刺激后IL-7水平可逐渐降至正常;2.经LPS刺激后,单核细胞3个亚群IL-7/IL7R表达水平略有差异,无统计学意义;3.在正常人单核细胞中,IL-7/IL7R可促进IL-10、IRF-4高表达,抑制TNFα、IL-6的表达。在RA患者中:1.IL-7/IL7R及TNFα表达量在初诊RA患者单核细胞中与正常人类似;2.难治性RA患者单核细胞中IL-7/IL7R表达量与TNFα、IL-6具有正相关,IL-7/IL7R可作为评估RA病情的标记物。同时RA患者出现了对LPS的免疫耐受;3.RA患者单核细胞中,IL-7/IL7R对TNFα的调控具有反馈机制,抗TNFα治疗后IL-7/IL7R表达量显著降低。