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一、目的研究川芎嗪、人参皂苷Rg1单用以及它们合用时对p-糖蛋白功能和表达的影响。二、方法1.细胞培养以及形态学验证培养Caco-2细胞、脐静脉内皮细胞ECV以及建立Caco-2单层细胞模型,用于研究川芎嗪和人参皂苷Rg1对p-糖蛋白功能和表达的影响。Caco-2细胞和ECV细胞均采用DMEM高糖培养基进行常规培养;细胞荧光免疫法进行p-糖蛋白表达验证;用Transwell板接种Caco-2细胞建立单层模型,采用细胞电位仪、荧光黄及普奈洛尔转运实验进行模型验证。2.细胞毒性试验采用MTT法,确定川芎嗪和人参皂苷Rg1的体外最大非细胞毒剂量,保证试验过程中细胞的活性。3.罗丹明-123外排试验以ECV细胞作阴性对照细胞,环孢素A作为p-糖蛋白功能抑制的阳性对照,使用高效液相紫外法研究川芎嗪和人参皂苷Rg1对p-糖蛋白底物罗丹明-123在Caco-2细胞中外排功能的影响。4.罗丹明-123转运试验环孢素A作为p-糖蛋白功能抑制的阳性对照,建立Caco-2单层细胞膜型,进一步研究川芎嗪和人参皂苷Rg1对罗丹明-123跨细胞膜转运功能的影响。5.p-糖蛋白表达的测定使用流式细胞仪分析川芎嗪和人参皂苷Rg1对Caco-2细胞上p-糖蛋白表达量的影响。三、结果1.细胞培养以及形态学验证Caco-2和ECV细胞形态正常;Caco-2单层细胞模型紧密且完整,细胞旁及跨细胞转运通路通透性良好;Caco-2细胞强表达p-糖蛋白,ECV细胞弱表达p-糖蛋白;Caco-2单层细胞模型成功建立,可用于川芎嗪和人参皂苷Rg1对p-糖蛋白转运功能;ECV细胞适合作为阴性对照细胞。2.细胞毒性试验川芎嗪和人参皂苷Rg1分别在60～240μg/mL和6～24μg/mL范围内为非细胞毒性剂量,与细胞培养72小时后细胞的存活率大于90%。3.川芎嗪和人参皂苷Rg1对罗丹明-123外排的影响中、高浓度(120、240μg/mL)的川芎嗪能够显著降低罗丹明-123从Caco-2细胞的外排(p＜0.05)。中浓度的人参皂苷Rg1对罗丹明-123的外排影响不大,没有显著性差异(p＞0.05)。高浓度(20μg/mL)人参皂苷Rg1对外排有影响(p＜0.05)。中浓度的川芎嗪和人参皂苷kg1(120、20μg/mL)合用时,对罗丹明-123的外排有显著的协同抑制作用排(p＜0.05)。4.川芎嗪和人参皂苷Rg1对罗丹明-123跨细胞膜转运的影响中、高浓度(120、240μg/mL)的川芎嗪在0.5、1.0和1.5h能够使罗丹明-123从Caco-2单层细胞的肠腔侧到肠内壁侧的累积转运量显著增加(p＜0.05)。中浓度(10μg/mL)的人参皂苷Rg1对罗丹明-123的转运无显著影响(p＞0.05),高浓度的人参皂苷Rg1(20μg/mL)使罗丹明-123累积转运量显著增加(p＜0.05)。中浓度的人参皂苷Rg1和川芎嗪(120、20μg/mL)合用则对罗丹明-123从肠腔侧到肠内壁侧的累积转运量具有协同增强作用(p＜0.05)。5.川芎嗪和人参皂苷Rg1对Caco-2细胞膜上p-糖蛋白表达的影响中、高浓度(120、240μg/mL)的川芎嗪使Caco-2细胞的p-糖蛋白表达水平显著下调(p＜0.05)。中、高浓度(10、20μg/mL)的人参皂苷Rg1对p-糖蛋白的表达影响不大(p＞0.05)。中浓度的人参皂苷Rg1与中浓度的川芎嗪(10、120μg/mL)合用后,对p-糖蛋白的下调无协同作用(p＞0.05)。四、结论1.川芎嗪是p-糖蛋白的底物,与p-糖蛋白上Rh-123受体竞争性结合,减少p-糖蛋白对细胞内Rh-123的外排,增强Rh-123跨小肠上皮细胞的转运。同时川芎嗪也是p-糖蛋白的抑制剂,通过直接抑制p-糖蛋白的活性而影响p-糖蛋白功能,长时间应用TNP可通过下调p-糖蛋白的表达水平影响降低肠道P-gp的活性。2.人参皂苷Rg1是p-糖蛋白的抑制剂,高浓度的人参皂苷Rg1通过直接抑制p-糖蛋白的外排转运功能而影响肠道p-糖蛋白的功能,长期应用不影响p-糖蛋白的表达水平。3.当川芎嗪和人参皂苷Rg1合用时,对肠道p-糖蛋白功能具有协同抑制作用,但是对p-糖蛋白的表达无协同作用。4.川芎嗪和人参皂苷Rg1和p-糖蛋白的其他底物合用时,可能会产生药物相互作用。川芎嗪和人参皂苷Rg1可增加其他p-糖蛋白底物的细胞内浓度,从而增加疗效或毒性作用。5.川芎嗪有可能作为多药耐药逆转剂,提供很有价值的肿瘤辅助治疗方法。