卵母细胞冷冻保存是一种具有潜在价值的技术,也是辅助生殖领域最具发展的研究之一。猪卵母细胞的冷冻保存及体外培养对于胚胎干细胞研究有很大的医学价值,但目前对于冻融后猪卵母细胞的体外培养和胚胎生产仍然落后,可能是由于在冻存过程中低温对卵母细胞造成的冷冻损伤,影响卵母细胞的质量。本试验主要目的是探究在玻璃化冷冻液中添加冷冻保护剂CLC(甲基-β-环糊精)是否对冻融后的猪GV期卵母细胞成熟率,透明带硬化时间、凋亡蛋白表达量及精卵结合产生影响。将冻融后的GV期卵母细胞通过体外成熟培养、透明带热溶解、蛋白免疫印迹(WB)等试验检测猪卵母细胞质量。新鲜猪精液的常规检测是作为辅助检测精卵结合的重要过程。设置添加浓度为0 mg/ml CLC的空白对照组,和添加浓度为0.5mg/ml、5mg/ml、1 mg/ml CLC的处理组,冷冻保存两周后的GV期卵母细胞进行体外成熟培养,结果显示:1.添加浓度为5mg/ml CLC时卵母细胞成熟率最高(74.67±4.67%),显著高于对照组(P<0.05)。添加浓度为5mg/ml CLC时透明带硬化时间最短,显著低于对照组(P<0.05)。2.添加浓度为5 mg/ml CLC时,Cleaved Caspase-3蛋白表达量最低。3.在精子黏附试验中,各浓度的处理组精子与卵母细胞黏附率均高于对照组。通过试验,在玻璃化冷冻液中添加冷冻保护剂CLC(甲基-β-环糊精)可减少猪卵母细胞在冷冻保存过程中受到的低温损伤,保护卵母细胞了质量从而提高精卵结合能力。