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研究背景：t(8；21)(q22；q22)是急性髓系白血病最为常见的染色体异常之一在原发急性髓系白血病中的发生率为6%-10%,而在M2型白血病中发生率可达18%-40%。在WHO分型中t(8；21)被认为是预后良好的异常染色体之一。然而在临床实践中,t(8；21)白血病复发、耐药等仍然威胁着患者的生命。因此,寻找新药对于提高该类患者完全缓解率乃至长期生存有重要临床价值。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF Related Apoptosis Inducing Ligand, TRAIL)属于肿瘤坏死因子家族,是一种Ⅱ型膜蛋白,可以通过与其特异性死亡受体(DR4, DR5)结合而激活凋亡信号传导途径,从而诱导肿瘤细胞凋亡。TRAIL已被证实对白血病细胞有杀伤作用而对正常宿主细胞无毒副作用。但是白血病细胞对TRAIL的耐药限制了它的临床应用。所以寻找能增强TRAIL诱导白血病细胞凋亡的药物可以提高其潜在的临床应用。白花丹醌(Plumbagin)是中药白花丹的主要活性成分,具有多种药理活性。同时白花丹醌也可抑制多种白血病细胞株以及实体瘤细胞株的生长和增殖。本课题组之前的研究已经证实白花丹醌能够在体外增强rsTRAIL(人重组可溶性三聚体TRAIL)诱导的白血病细胞株Kasumi-1凋亡,有潜在逆转TRAIL耐药的作用。因此,有必要进一步在实验动物体内验证白花丹醌逆转TRAIL耐药的作用。非肥胖糖尿病／重症联合免疫缺陷鼠(Non-obese Diabetic Severe Combined Immunodeficiency mice简称NOD/SCID)既有先天免疫缺陷,又有T和B淋巴细胞缺乏,各种肿瘤细胞可以植入,且较少发生排斥反应及移植物抗宿主病(GVHD)。本研究旨在体外研究的基础上,进一步观察rsTRAIL联合白花丹醌在NOD/SCID鼠体内诱导Kasumi-1细胞皮下移植瘤凋亡的作用,并初步探讨体内与体夕(?)rsTRAIL及白花丹醌对t(8；21)白血病细胞作用机制的异同。第一部分：白花丹醌增强rsTRAIL诱导的Kasumi-1细胞凋亡在NOD/SCID(?)、鼠体内的研究目的：观察白花丹醌、rsTRAIL单独及其联合在NOD/SCID小鼠体内诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用。方法：把Kasumi-1细胞移植瘤的荷瘤鼠随机分成生理盐水对照组、阿糖胞苷组、rsTRAIL单药组、白花丹醌单药组及rsTRAIL联合白花丹醌组。观察荷瘤鼠皮下肿瘤体积和重量等。取瘤块和小鼠各脏器做HE染色病理切片。结果：(1)与生理盐水对照组相比,rsTRAIL、白花丹醌对NOD/SCID荷瘤鼠移植瘤生长均有明显的抑制作用,统计学差异具有极其显著性意义(P<0.01),且rsTRAIL与白花丹醌联用有增效作用(P<0.05)。rsTRAIL组、白花丹醌组及rsTRAIL联合白花丹醌组的抑瘤率分别为56.74%,65.17%和90.07%。(2)在NOD/SCID鼠皮下接种Kasumi-1细胞,可造成脾脏及骨髓累及。(3)白花丹醌(6mg/kg)对于NOD/SCID荷瘤鼠有一定毒性,可引起小鼠腹泻。结论：白花丹醌在NOD/SCID小鼠体内具有增强rsTRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用,药物对小鼠各脏器无明显损伤。第二部分白花丹醌在NOD/SCID小鼠体内增强rsTRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡的机制研究目的：探讨白花丹醌在NOD/SCID小鼠体内增强rsTRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用机制。方法：观察镜下肿瘤细胞形态,用Annexin V-FITC/PI流式检测各组小鼠移植瘤单细胞悬液中细胞凋亡率,并用流式细胞仪检测细胞膜表面rsTRAIL、DR4、DR5蛋白水平表达变化。结果：(1)rsTRAIL联合白花丹醌组小鼠的肿瘤细胞悬液,与rsTRAIL单药组和白花丹醌单药组相比,细胞凋亡率明显增加,前者(?)nnexinV-FITC阳性率水平为(68.23±6.74)%,后两者分别为(47.39±9.99)%和(51.35±3.58)%,统计学差异具有极显著性意义(P<0.01)。(2)流式细胞仪检测发现白花丹醌可以上调细胞膜表面DR4和DR5的表达。结论：白花丹醌在NOD/SCID小鼠体内有增强rsTRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用,其机制可能与上调TRAIL受体DR4和DR5有关。