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目的：应用分子生物学克隆技术,构建并筛选能够稳定表达荧光素酶蛋白的肝癌细胞株,并将其用于建立可进行活体成像观察的裸鼠人肝癌移植瘤模型。方法：1、通过脂质体转染法将携带有荧光素酶基因的质粒pMetluc-Mem control转染进入肝癌细胞SMMC7721、SK-HEP-1和Hep3B,用抗生素G418筛选转染后的肝癌细胞单克隆,并通过荧光素酶发光强度检测,得到表达荧光素酶基因的单克隆肝癌细胞株。2、应用逆转录病毒载体pMSCVneo,向其中插入荧光素酶基因pMetLuc,构建重组逆转录病毒质粒pMSCV-Metluc,转染病毒包装细胞PT67,建立可产生高滴度MSCV-Metluc逆转录病毒的稳定单克隆细胞株；检测采用超速离心法对包装细胞分泌的病毒进行浓缩。3、利用产病毒细胞株产生的MSCV-Metluc逆转录病毒病毒感染人肝癌细胞SMMC7721、SK-HEP-1和Hep3B,用抗生素G418筛选感染后的肝癌细胞单克隆,并通过荧光素酶发光强度检测,得到稳定表达荧光素酶基因的单克隆肝癌细胞株。4、应用稳定表达荧光素酶基因的肝癌细胞株,通过皮下接种细胞悬液和肝部原位移植瘤块的方法建立人肝癌裸鼠移植瘤模型,并通过活体成像系统观察肿瘤生长情况。结果：1、脂质体转染后的肝癌细胞SMMC7721、SK-HEP-1和Hep3B经过G418的筛选,获得表达荧光素酶基因的三种肝癌细胞的单克隆株,标记细胞的形态、生长速度等与未转染细胞无明显差异。2、成功构建pMSCV-MetLuc重组质粒,转染包装细胞PT67,筛选出了能稳定分泌重组逆转录病毒的PT67细胞克隆,最高病毒滴度为1×106cfu/ml,浓缩后病毒滴度可达1×107cfu/ml。3、以荧光素酶重组逆转录病毒感染肝癌细胞,经单克隆筛选和荧光素酶发光检测后,得到稳定表达荧光素酶基因的肝癌细胞SMMC7721-luc(v)、 SK-HEP-1-luc(v)和Hep3B-luc(v),可以用于活体成像。4、裸鼠皮下接种携带有荧光素酶基因的肝癌细胞,一周后可以肉眼观测到明显的瘤块,以活体成像系统检测可以看到SMMC7721-luc(v)、SK-HEP-1-luc(v)、 Hep3B-luc(v)三种肝癌细胞构建的皮下移植瘤的发光强度分别是7.205×106光子/秒、5.681×105光子/秒、1.924×106光子/秒。5、裸鼠肝部原位移植携带有荧光素酶基因的肝癌移植瘤瘤块,术后10d的活体成像结果显示,接种移植瘤瘤块的肝脏部位生物发光强度达到4.888×105～6.008×105光子/秒。结论：本实验通过脂质体和逆转录病毒载体转染的方法建立了能稳定表达荧光素酶基因的肝癌细胞,并以此建立能在活体成像系统下测量的裸鼠人肝癌皮下和原位移植瘤模型,为活体动物水平监控肿瘤的生长、评价治疗效果以及肿瘤的转移分析提供了一种新的检测方法。