特异性识别猪瘟病毒野毒株的单克隆抗体的制备

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猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种高度接触性传染病,该病被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疫病名录(OIE-listed diseases),为须申报的(notifiable)动物传染病。近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大的变化,在临床表现上趋于非典型化,主要表现为隐性带毒和慢性感染,成为影响养猪业发展的重大隐患。由于猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)在我国的大规模使用,使得猪群中猪瘟抗体多数呈阳性,这种疫苗抗体很容易与猪瘟野毒感染产生的抗体相混淆,从而不易区分疫苗接种猪与野毒感染猪,给猪瘟诊断带来困难。E2囊膜糖蛋白是猪瘟病毒的主要结构蛋白,是猪瘟病毒中和抗体的主要靶标,是抗猪瘟病毒感染的主要保护性抗原,因此,猪瘟病毒E2蛋白是开发猪瘟新型疫苗、诊断试剂及研究猪瘟病毒致病机理的重要靶蛋白。本研究根据昆虫细胞密码子偏爱性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,利用昆虫杆状病毒表达系统进行表达,表达水平约为野生型猪瘟病毒E2基因的3倍。此外,用E2蛋白免疫家兔可以使其抵抗猪瘟兔化弱毒的攻击。采用环磷酰胺免疫抑制法,用纯化的杆状病毒表达的HCLV株E2蛋白(HCLV-E2)作为耐受原,石门株E2蛋白(Shimen-E2)作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为4A4。经检测,该单克隆抗体能够与石门株发生反应,同时能与1.1、2.1、2.2和2.3基因亚群猪瘟野毒发生特异性反应,并具有中和活性,而与HCLV株不发生反应。该单克隆抗体可以用于鉴别猪瘟野毒株和猪瘟兔化弱毒疫苗株,为建立一种区分猪瘟野毒感染与疫苗接种的诊断方法与研究猪瘟强毒和弱毒之间的分子差异奠定了基础。
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