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目的探讨以慢病毒为载体介导人碱性成纤维生长因子(human basic fibroblastgrowth factor,hbFGF)基因修饰骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell,BMSC)治疗肢体缺血的可行性。方法1、采用密度梯度离心方法获取SD(Sprague Dawley)大鼠BMSC,用含有10%胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)作为培养基,获取第3—5代BMSC。2、以慢病毒构建人碱性成纤维生长因子基因载体,转染大鼠BMSC,获取人碱性成纤维生长因子基因修饰BMSC。3、24只SD大鼠均切除右侧股动脉及其分支,形成后肢缺血模型鼠。成模后随机分为4组(每组6只):bFGF-BMSC组,缺血后肢肌内多点注射bFGF基因修饰的BMSCs;GFP-BMSC组,缺血后肢肌内多点注射携带绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)空载病毒转染的BMSCs;BMSC组,缺血后肢肌内多点注射普通BMSCs;PBS组,肌内注射与前者等体积的磷酸盐缓冲液(phosphatebuffer saline,PBS)。4、细胞移植4周后,取内收肌和腓肠肌组织,一部分用于冰冻切片,记数微血管密度并观察移植细胞的改变;另一部分用于western blot实验,检测bFGF、VEGF等在动物体内的表达。结果1、通过密度梯度离心方法,可获得相对纯化的BMSC。2、 BMSCs接受慢病毒转染2d后,在荧光显微镜下观察到强烈的绿色荧光。3、细胞移植2周后,受体动物体内可见绿色荧光阳性细胞,其中GFP-BMSC组,GFP+细胞数(15.4±3.85)个/视野低于bFGF-BMSC组(26.6±3.51)个/视野(t=4.811,P=0.001)4、干细胞在体内分化为血管内皮细胞,但是GFP-BMSC组的GFP+CD31+细胞数(7.0±2.12)/视野低于bFGF-BMSC组(14.0±1.58)/视野(t=5.916,P=0.000)。5、 BMSC组微血管密度为(24.0±4.3)/视野,明显高于PBS组(8.8±4.5)/视野(t=2.65,P=0.017);GFP-BMSC组(28.6±4.2)/视野,与BMSC组无差异(t=0.8,P=0.434);bFGF-BMSC组(55.0±16.5)/视野,高于BMSC组(t=5.4,P=0.000)6、实验动物接受细胞移植2周后,在bFGF-BMSC组动物缺血区的肌组织中,能够通过western blot检测到人源性bFGF。结论慢病毒介导的基因修饰细胞可在体内存活,人碱性成纤维细胞生长因子基因修饰的BMSC,可在受体体内存活并表达人碱性成纤维细胞生长因子,以此促进BMSC在体内分化为血管内皮细胞,促进受体缺血区的血管再生,而不对受体动物产生危害。