目的:探究FABP5/PPARβ/δ信号转导通路对Ras雄性小鼠肝癌发生发展的影响,为肝癌的防治研究提供有效的基础数据。方法:1.体内实验对病理证实的正常雄性小鼠肝组织及Ras雄性小鼠肝癌组织及Ras雄性小鼠肝癌旁组织进行总RNA及蛋白质的提取。应用RT-q PCR方法检测FABP5、PPARβ/δ、PDK1及ILK的m RNA表达水平。用Western blot方法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK 1/2(p-ERK1/2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT、NF-κB、磷酸化NF-κB、NF-κB抑制蛋白亚基(I-κB)、脂肪酸结合蛋白5(FABP5)、过氧化物酶体增殖物激活受体β/δ(PPARβ/δ)的蛋白水平。2.体外实验提取人正常肝细胞LO2和肝癌细胞Hep3B的总蛋白质,Western blot方法检测p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、I-κB的蛋白水平。用PI3K、AKT抑制剂处理Hep3B细胞,检测FABP5的蛋白表达水平。结果:1.体内实验(1)病理检测结果表明:Ras癌基因诱导了Ras雄性小鼠的多发性肝肿瘤,体积较大,直径≥5mm;病理切片的诊断结果表明,肝肿瘤组织与其周围正常肝组织的界限清楚,肝肿瘤组织周围正常肝组织的2~3层肝细胞由于受到挤压而呈现出梭形或纺锤形;肝肿瘤组织中的肝细胞分化良好,可见正常的肝小叶结构,肝肿瘤细胞的胞质呈现出嗜碱性改变,肿瘤细胞出现肿胀变性,以及中等程度的脂肪变性,部分肝肿瘤细胞内还可见嗜酸性包涵体。Ras转基因雄性小鼠的肝脏没有发生炎症、肝纤维化、肝硬化的病理学特征。(2)PPARβ/δ表达情况的检测:其中,从蛋白结果可知,正常雄性小鼠肝组织、Ras雄性小鼠肝癌旁组织中PPARβ/δ的蛋白表达水平显著高于Ras雄性小鼠肝癌组织;正常雄性小鼠肝组织中PPARβ/δ的蛋白表达水平高于癌旁组织。RT-q PCR结果显示,PPARβ/δ在正常雄性小鼠肝组织、Ras雄性小鼠的癌旁组织及肝癌组织中呈逐步升高趋势,但无显著差异。(3)信号通路检测结果表明:与正常雄性小鼠肝组织、Ras雄性小鼠癌旁组织相比,肝癌组织中ERK和p-ERK的蛋白水平都显著升高。与正常雄性小鼠肝组织相比,Ras雄性小鼠癌旁组织中ERK的蛋白水平没有显著变化,而p-ERK的蛋白水平却显著升高。与正常雄性小鼠肝组织、Ras雄性小鼠癌旁组织相比,肝癌组织中PI3K、p-PI3K、p-AKT、p-NF-κB、核蛋白NF-κB、FABP5的水平显著升高,NF-κB、质蛋白NF-κB、I-κB、PPARβ/δ的蛋白水平显著降低。癌旁组织与正常雄性小鼠组织相比,p-PI3K、NF-κB、质蛋白NF-κB、和I-κB的蛋白水平没有显著变化。2.体外实验(1)PPARβ/δ表达水平的检测结果表明:人肝癌Hep3B细胞PPARβ/δ的蛋白表达水平显著高于人正常LO2肝细胞。(2)信号通路检测结果表明:对于p-PI3K蛋白,人正常肝细胞系L-O2和人肝癌细胞系Hep3B没有显著差异。对于PI3K总蛋白,人正常肝细胞系L-O2却显著高于人肝癌细胞系Hep3B。而I-κB蛋白在两个细胞中的表达没有显著差异。(3)抑制剂处理实验结果表明:与Hep3B细胞相比,PI3K抑制剂LY294002处理Hep3B细胞使FABP5的蛋白表达水平显著下降,其蛋白表达水平也随之在24-48 h明显降低;AKT抑制剂MK-2206 2HCl处理Hep3B细胞显著也降低了FABP5的蛋白水平。结论:1.体内研究表明,在Ras癌基因诱导的肝癌发生过程中,ERK、PI3K/AKT、NF-κB信号通路的激活可能是促进FABP5在肝癌细胞中的过表达的主因,但它们之间的协同关系还需进一步研究。2.体外研究表明,在人Hep3B肝癌细胞中,FABP5的表达水平主要受PI3K和AKT的调节。