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研究背景和目的:胃癌在世界范围内属于较为高发的消化系统恶性肿瘤,其发病率以及死亡率在我国的恶性肿瘤中亦位居前列。并且胃癌的发病率在我国有明显的地域差异,由于生活压力的增大、饮食习惯的改变、幽门螺杆菌的感染等,使胃癌的发病率呈现出越来越年轻的趋势。但因为缺少有效且稳定的早期诊断手段,大部分胃癌发现时已是中晚期,预后相对比较差。与大多数的实体肿瘤相似,胃癌的生长需要大量的营养物质来提供保证,而血管生成在其中又扮演着重要作用,因此可以提供给我们很好的治疗靶点。但就目前而言,针对胃癌的抗血管生成的药物大多是二、三线治疗,因此在胃癌中对于血管生成的研究仍需要进一步的探索。为了提高胃癌的的诊断率,非侵入性的和更敏感的诊断方法正在被广泛的研究中。环状RNA是一类新发现的且能稳定存在的RNA,属于非编码家族中的成员;外泌体则是一类细胞来源的小囊泡结构,通过运输的蛋白质和各种RNA(包括环状RNA)等来介导细胞间的信息交流。结合最新的研究发现,肿瘤细胞所处的微环境以及肿瘤细胞之间的信息交流会影响肿瘤的发生发展、转移及耐药,外泌体是最近几年发现的在细胞间通讯中起关键作用的基质成分。然而,外泌体源性的环状RNA在胃癌中的作用机制尚不明确。本研究将利用环状RNA相对稳定的特点,探索其在胃癌早期诊断中的价值和其作为吸附海绵的功能对血管生成的影响,希望为胃癌的早期诊断和抗血管生成方面的治疗提供新的思路。研究方法:1.外泌体提取自胃癌病人和正常人群的血浆中,之后外泌体的总RNA被分离出来,通过RNA的低密度芯片可以预测出外泌体中环状RNA的表达情况。送检的样本是来自18个胃癌病人和12个正常人群的血浆混合而成,之后我们又选取了另外的50个胃癌病人和19个正常人群的血浆作为研究对象进行了一一验证,并且分析了其诊断价值。2.外泌体的形态和表达情况则通过电子显微镜和Western blot技术来进行鉴定和验证;向胃癌细胞SGC-7901中转染miR-29a的类似物和抑制剂将其上调和下调,环状RNA的干扰质粒使胃癌细胞SGC-7901中环状RNA(hsacirc0044366)下调,随后用超速离心的方法分别提取处理过的SGC-7901细胞中的外泌体,用来处理HUVEC细胞。3.用相关的功能学实验(transwell实验、血管成环实验、Edu增殖实验)来验证胃癌细胞中环状RNA(hsacirc0044366)对血管内皮细胞的迁移能力、成环能力以及增殖能力的影响。研究结果:1.与正常人群的血浆比较,4种环状RNA(hsacirc0082109,hsacirc0072525,hsacirc0065755 and hsacirc0010522)在胃癌病人的血浆中均呈现明显的高表达状态。而这4种环状RNA的曲线下面积(AUC)分别为0.938,0.942,0.958和0.982;特异性和敏感性分别为(0.84,0.95),(0.98,0.95),(0.8,0.95)和(0.92,0.79)。2.后续的功能学实验证实,环状RNA(hsacirc0044366)可以通过吸附miR-29a使其表达下调,从而促进血管内皮细胞的迁移、成环和增殖能力。研究结论:我们的研究发现一些外泌体源性的环状RNA在胃癌病人血浆中明显升高,并且可以作为诊断胃癌的一种新型生物标志物。同样,环状RNA可以通过吸附海绵的作用调节microRNAs的表达,从而对血管生成产生一定的调节作用。