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禽流感(Avian Influenza，AI)是由禽流感病毒(AIV)引起的一种高度接触性传染病，几乎所有的野生及家养禽类都可感染，该病经常给养禽业造成严重的经济损失，是目前影响世界养禽业的最严重的疾病之一。禽流感PA蛋白作为禽流感病毒RNA聚合酶的一部分，在体内外的转录和复制中起着非常重要的作用。M2蛋白是禽流感病毒的跨膜蛋白，含有高度保守的抗原表位，是理想的交叉保护性疫苗的候选抗原。本研究的目的就是扩增PA基因并构建其表达载体，为基因工程疫苗的研制奠定基础，同时表达、纯化M2蛋白，为进一步研究M2蛋白的功能及其与宿主细胞的相互作用机制奠定分子生物学基础。利用纯化的M2蛋白制备多克隆抗体，为禽流感的检测提供有力的工具。利用PCR技术扩增A／Bar-headed Goose／Qinghai／12／05(H5N1)亚型禽流感病毒的PA基因，将该基因片段定向插入到克隆载体pGEX-6p-1中，然后将连接产物转化宿主菌DH5α，挑取阳性克隆进行PCR和BamHⅠ，NotⅠ双酶切鉴定并测序。测序结果表明，禽流感病毒PA基因全长2151 bp，编码717个氨基酸。将PA基因序列通过NCBI Blastn分析，与已发表的序列A／migratory duck／Jiangxi／1701／2005(H5N1)及A／peregrine falcon／HK／D0028／2004(H5N1)同源性都达到98％。将PA基因克隆至原核表达载体pGEX-6p-1，经酶切鉴定及PCR鉴定，证明成功构建了融合表达载体pGEX-PA。将重组质粒pGEX-AM2转化大肠杆菌BL21，在37℃用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达，收集不同的菌液进行聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)，结果表明AI病毒M2在大肠杆菌中能高效表达，表达的目的蛋白主要以沉淀形式存在，蛋白的分子量约为35KD。为了验证M2蛋白能否以可溶性形式存在，采用以下两种方法：(1)在低温16℃进行诱导；(2)将重组质粒pGEX-AM2转化大肠杆菌的roccata菌株，在37℃用IPTG诱导表达。结果表明，采用第一种方法，上清中没有蛋白，而第二种方法上清中有一定量蛋白存在。接着对上清和沉淀分别进行纯化，得到的蛋白仍是包含体形式。最后用纯化的蛋白免疫小鼠，制备多克隆抗体。经Western blot实验检测，此多克隆抗体主要是针对目的蛋白M2的多抗。