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目的建立一种基于DNA环介导恒温核酸扩增技术(LAMP)快速检测空肠弯曲杆菌和幽门螺杆菌的方法,并对该方法检测两种细菌的特异性及敏感性加以验证。方法1.以空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因(HipO基因)、幽门螺杆菌尿素酶B基因(UreB基因)为靶序列分别设计特异性引物5-6套;2.通过比较各引物的扩增效率分别筛选出针对空肠弯曲杆菌和幽门螺杆菌扩增效率较高的引物组合;3.以其他菌株和ddH20作为对照,对备选引物按照扩增效率高低逐一进行特异性检验,直至2种细菌各选出1套扩增效率高且特异性好的最佳引物组合;4.分别筛选出两种细菌LAMP反应的最佳反应温度;5.将细菌DNA模板原液用ddH20进行10倍梯度稀释,判定LAMP法检测空肠弯曲杆菌、幽门螺杆菌的敏感性。6.用LAMP法分别检测50例腹泻患者粪便样本中的空肠弯曲杆菌和80例胃液样本中的幽门螺杆菌,对LAMP法检测两种细菌阳性率、灵敏度、特异度与其他常用方法进行比较。结果1.空肠弯曲杆菌LAMP反应最佳引物组合为CJ-5,幽门螺杆菌LAMP反应最佳引物组合为HPUB-3,反应均在60min内完成;2. LAMP法的特异性检测结果显示,实验中选取的两组特异性引物能分别使空肠弯曲杆菌和幽门螺杆菌发生扩增反应,而不能使其他菌株和ddH20发生扩增反应;3. LAMP法的敏感性检测结果显示,空肠弯曲杆菌的最低检出限为6.97×102拷贝/μl,幽门螺杆菌的最低检出限为2.61 ×103拷贝/μl;4.应用LAMP法对50例腹泻患者粪便样本进行检测,未发现空肠弯曲杆菌,与PCR法结果一致;应用LAMP法对80例胃液样本中幽门螺杆菌进行检测,其阳性检出率为41.25%,灵敏度为94.3%,特异度为95.7%,与PCR法、病理组织学检查及13C呼气试验结果无统计学差异(P>0.05)。结论1.本研究以HipO基因、UreB基因为靶序列设计并筛选LAMP引物,分别用于检测空肠弯曲杆菌和幽门螺杆菌,具有较高的扩增效率和良好的特异性;2.临床胃液标本检测结果显示,LAMP法检测幽门螺杆菌阳性率与其他常用方法无明显差异,且灵敏度、特异度均较高;3. LAMP法检测空肠弯曲杆菌和幽门螺杆菌所需器材简便、成本较低、检测过程简单、所需时间短,特别适合用于现场、基层检疫及医疗机构的快速诊断。