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第一部分目的:鞘氨醇激酶（sphingosine kinases,SphKs）是生物体内催化鞘氨醇（sphingosine,Sp）并将其转化为生物活性物质1-磷酸鞘氨醇（sphingosine-1-phosphate,S1P）的关键酶。SphKs包含SphK1和SphK2两个亚型,调控S1P/神经酰胺（ceramide,Cer）的动态平衡,其在生物体内表达及活性的变化与多种疾病密切相关。目前SphK2在非酒精性脂肪肝（Non Alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD）疾病中的具体作用及相关分子机制尚不明确。本课题旨在探究SphK2在高脂饮食（high-fat diet,HFD）诱导小鼠肝脏脂质代谢紊乱及NAFLD疾病进程中的具体作用及分子机制,为NAFLD的防治及新型药物靶点的筛选提供前期实验依据。方法:1、本研究采用野生型WT小鼠与肝细胞特异敲除SphK2基因(SphK2Hep-/-)小鼠HFD诱导20周。动物水平上探索SphK2与NAFLD的相关性及其在NAFLD进程中的作用;2、体外细胞水平,提取WT小鼠、SphK2Hep-/-小鼠原代肝细胞,采用棕榈酸（palmic acid,PA）模拟小鼠肝细胞脂毒性,检测SphK2对肝细胞脂毒性的影响如:肝细胞损伤水平、甘油三酯（triglycerides,TG）沉积水平和肝细胞脂质代谢相关信号通路的基因表达情况等。3、通过小鼠肝脏代谢组学检测筛选出受SphK2调控的显著差异代谢物,同时在原代肝细胞中验证SphK2与代谢物的关系及相关分子机制。结果:1、WT与SphK2Hep-/-小鼠HFD诱导20周,SphK2Hep-/-小鼠肝脏表现出更加严重肝脏脂质沉积、空泡样变、胰岛素抵抗;2、SphK2Hep-/-小鼠肝细胞损伤及线粒体肿胀程度较WT小鼠加重。3、体外实验结果表明PA诱导的原代SphK2Hep-/-肝细胞同样表现出更为严重细胞脂毒性,包括胞内TG累积及肝细胞损伤。4、SphK2Hep-/-小鼠肝脏PPARγ-CD36脂质摄取信号通路过度激活,进一步加重肝内脂质累积。结论:肝细胞SphK2参与HFD诱导的小鼠肝脏脂质代谢紊乱并影响NAFLD疾病进程。其作用机制可能通过干预PPARγ-CD36信号通路,调控肝细胞游离脂肪酸的摄取和肝内TG含量,干预肝脏胰岛素敏感性,进而影响NAFLD的发生发展。本研究提示SphK2有望成为针对NAFLD的药物研发的新靶点。第二部分目的:非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatohepatitis,NASH）是以肝细胞脂质沉积及炎症细胞浸润为特点的疾病。目前临床尚无特效药物进行干预治疗。中药单体虎杖苷（Polydatin,PD）,即白藜芦醇苷,具有良好的抗氧化和抗炎药理活性。PD相较于白藜芦醇具有更好的水溶性、抗氧化性和更低的药物毒性。本实验室前期研究表明PD可以改善四氯化碳诱导小鼠肝纤维化。基于前期研究,本课题将探究PD对NASH及肝纤维化的药效及分子机制。方法:1、实验采用C57BL/6小鼠随机分为3组,对照组小鼠（8只）给予正常饲料,模型组小鼠（10只）给予蛋氨酸-胆碱缺乏（MCD）饲料诱导NASH合并肝纤维化,PD组小鼠（10只）在MCD诱导下每天腹腔注射5 mg/kg PD进行治疗,共持续4周。2、体外研究采用PA（0.25mM）诱导Hep G2细胞系进行。结果:1、给药组PD治疗四周后显著下调MCD诱导小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）,天冬氨酸转氨酶（AST）。同时PD显著抑制了caspase-3、TUNEL阳性表达及MCD小鼠肝脏TG含量。2、PD抑制NOX4氧化酶、炎症因子CD68和Toll样受体（TLR）4/NF-κB p65信号通路。3、PD改善脂多糖（LPS）协同或PA诱导的肝细胞脂质堆积、炎症及肝细胞凋亡。4、PD显著抑制NASH小鼠相关肝纤维化指标。结论:1、PD改善MCD饮食诱导NASH小鼠的肝损伤及肝脏脂质沉积;2、PD通过抑制氧化应激和炎症反应从而抑制NASH及肝纤维的进展。本研究提示PD有望开发成为一种治疗NASH合并纤维化的新型药物。