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研究背景: 癫痫是一组由神经元异常放电所导致的中枢神经系统功能失常的综合征,神经元异常放电常表现为高度同步化,且具有一定自限性。癫痫发作的主要特征为发作性、短暂性、反复性及刻板性。据估计,全球大约有五千万癫痫患者,且每年仍有不少新发。目前癫痫的治疗仍以药物为主,但是有部分患者表现为药物难治性癫痫,研究显示FCD是药物难治性癫痫的重要原因。目前关于癫痫的发病机制仍不清楚,近期的研究集中在细胞信号传导通路上。如果能确定某些细胞信号传导通路与癫痫发生发展的关系,甚至进一步干扰参与细胞信号通路的传导,则可能为药物难治性癫痫的治疗提供新的方向。雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路是目前研究的热点。既有的研究表明mTOR与癫痫的发生发展关系密切,不仅参与了如突触可塑性改变、神经元变性及胶质细胞增生等癫痫相关的病理改变,还参与调控神经元凋亡/程序性死亡。所以mTOR信号通路在FCD病灶中的激活情况值得探究。 研究目的: 本研究通过免疫组织化学的方法,观察mTOR信号通路(p-m-TOR,p-70S6K)以及抑制凋亡基因Bcl-2在FCD组织中的表达情况,为探索FCD的发病机制提供相关依据,也为进一步的治疗研究提供参考。 材料和方法: 取广州医科大学自2011年至2014年药物难治性癫痫患者手术切除的病灶,术前运用磁共振、脑电图、PET/CT等进行术前评估和定位,术中脑电图确定病灶范围,术后病理诊断参考2011年国际抗癫痫联盟(international league against epilepsy,ILAE)新制定的诊断标准,确诊为FCD的患者的脑组织标本石蜡切片为实验标本。其中FCD I型和FCD II型各13例,共26例,正常脑组织切片3例为对照组。分别使用p-m-TOR,p-70S6K,Bcl-2抗体进行S-P免疫组织化学染色,然后在显微镜下观察、拍照,计数阳性细胞数,并进行统计分析(T检验)得出结果,了解mTOR信号通路在FCD病灶组织中的表达情况。 实验结果: 1、正常脑组织病灶中无观察到p-m-TOR表达,而在FCD病灶中有表达,且FCD I型与FCD II型病灶中表达情况存在差异,400倍光镜下,FCD II型病灶中阳性细胞数为51.20±7.26,FCD I型病灶中阳性细胞数为25.63±6.02,FCD II型病灶中表达明显强于FCD I型,且差别具有统计学意义(P<0.01)。 2、p-70S6K在正常脑组织中未观察到阳性表达,而在FCD病灶中有阳性染色,并且在FCD I型与FCD II型病灶中表达情况存在差异,400倍光镜下,FCD I型病灶中阳性细胞数为33.95±5.42,FCD II型病灶中阳性细胞数为39.92±7.27,差别具有统计学意义(P<0.01)。 3、Bcl-2在正常脑组织中不表达,而在FCD病灶中有表达,在FCD I型病灶中阳性细胞数为31.81±5.16,在FCD II型病灶中阳性细胞数为37.55±9.37,类似于p-m-TOR和p-70S6K,FCD II型病灶中的表达情况高于FCD I型,差异具有统计学意义(P<0.01)。 4、FCD病灶中血管部位可见可疑p-m-TOR表达。 结论: 1、P-m-TOR及p-70S6K在FCD病灶中的表达情况,提示mTOR信号通路在FCD病灶中异常激活,且FCD II型病灶中的活化情况明显高于FCD I型病灶。mTOR信号通路可能参与了FCD的发病机制。 2、Bcl-2在FCD病灶中异常表达,且在FCD II型病灶中的表达情况明显高于FCD I型病灶,说明FCD病灶中存在神经元凋亡,可能是由于mTOR信号通路激活,调控凋亡相关蛋白的表达所致。 3、mTOR信号通路可能与FCD病灶中新生血管的形成有关。