荧光碳点的制备及其与人血清白蛋白的相互作用和作为荧光探针用于环丙沙星的检测

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碳点是近些年来迅速发展起来的碳纳米颗粒,具有稳定的荧光性能、耐光漂白性、低毒性和良好的生物相容性等特性,作为环境友好型的荧光纳米材料,其在生物医学和分析检测等领域中具有广泛的应用前景。本文首先采用熔融法分别制备出两种水溶性的荧光碳点,然后研究了碳点与人血清白蛋白(HSA)的相互作用和作为荧光探针用于环丙沙星(CIP)的检测。主要研究内容如下:1、以柠檬酸和甘氨酸为原料,采用简单、简便的一步熔融法,成功制备了一种水溶性的荧光碳点。在最佳的合成条件下,得到的碳点的荧光量子产率可达35.6%,呈球形,分散均匀,平均直径约为3.0 nm。此外,碳点在345 nm激发时,能发出较强的蓝色荧光,其表面有大量的-COOH、-OH和-NH2等基团。为了从分子水平阐明所制备的碳点和HSA的作用机制,在模拟生理环境条件下,分别利用稳态荧光、紫外-可见吸收光谱、圆二色光谱、拉曼光谱和循环伏安法等探究了所制备的碳点与HSA的相互作用。通过Stern-Volmer曲线、紫外-可见吸收光谱和荧光寿命的测定指出,碳点对HSA的荧光猝灭属于静态猝灭。碳点和HSA体系在三个不同温度下的结合常数约为104 L/mol数量级。计算所得到的热力学参数值表明,碳点与HSA的结合过程主要是由疏水力和氢键驱动的自发反应。取代实验证实,碳点在蛋白质上的结合主要发生在位点I。基于F?rster非辐射能量转移理论,计算求得碳点与蛋白质色氨酸残基的平均距离为2.3 nm。同步荧光、三维荧光、拉曼光谱和圆二色光谱结果分析指出,在碳点存在下,HSA通过展开蛋白质多肽链和增加Trp和Tyr残基微环境的极性而发生了一些构象变化。研究结果为荧光碳点的实际应用提供了一些实验数据和理论参考。2、以苹果酸为碳源,磷酸铵为钝化剂,采用熔融法一步合成荧光碳点。在最佳的合成条件下,得到的碳点的荧光量子产率为20.7%,呈分散均匀的球形,平均直径约为3.3 nm。红外光谱和X射线光电子能谱分析结果表明,所制备的碳点表面含有-COOH、-OH和-NH2等官能团。基于CIP对碳点的荧光增敏作用,建立了一种CIP的定量分析方法。通过实验可知,碳点的最佳使用浓度为7.50×10-66 mol/L,最佳pH值为5.91,最佳孵化时间为3 min。在优化的实验条件下,CIP的浓度在0.39×10-64.00×10-55 mol/L范围内与碳点的荧光强度增加值ΔF呈良好的线性关系,线性拟合方程为:ΔF=1.61×107[CIP]-3.28,相关系数R2=0.994,方法的检出限为0.12×10-66 mol/L,精密度为4.2%。干扰实验结果指出,除了铜离子有一定的影响外,其他离子基本不产生影响,且铜离子的干扰可用4%的草酸铵溶液掩蔽。本方法应用于实际样中CIP的浓度测定,回收率在90%110%之间。该方法简单、快速、灵敏度高、线性范围宽、准确可靠,是一种有效的测定CIP新方法。
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